CAJ | 학술논문

背景与目的:Survivin是IAPs家族的重要成员之一,研究表明可结合凋亡途径中的Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9抑制其活性,引起肿瘤细胞的抗凋亡作用,尤其使肿瘤细胞耐受化疗药物诱导的凋亡,与化疗耐药密切相关.survivin在人口腔表皮癌细胞KB及其耐药株KBv200均有表达,本实验拟通过RNAi方法沉默survivin基因比较研究它介导KB和KBv200细胞的凋亡作用.方法:RT-PCR法检测细胞中survivin mRNA水平,流式细胞仪检测细胞中survivin蛋白水平,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态,PI染色结合流式细胞仪法检测细胞凋亡率,以及Caspase-3活性测定试剂盒检测Caspase-3的活性,MTT法测定肿瘤细胞生长情况.结果:KBv200细胞中survivin mRNA和蛋白表达量较高.转染mu6/survivin质粒后48 h,KB和KBv200细胞中survivin mRNA表达抑制率分别为(61.98±8.12)%和(59.29±6.32)%,蛋白表达抑制率分别为(44.25±5.26)%和(38.76±4.31)%.转染mu6/survivin质粒后24 h、48 h、72 h,流式细胞仪结果显示KB和KBv200细胞凋亡都明显增加,均在48 h凋亡达到高峰,以KB凋亡率较高,并且Caspase-3活性也都明显增加,均在48 h达到最高.同时KB细胞生长抑制率分别为(33.04±2.17)%、(56.25±3.32)%和(58.26±5.15)%,KBv200细胞生长抑制率则分别为(35.23±3.43)%、(44.90±4.12)%和(44.19±4.37)%.结论:siRNA方法能够有效沉默survivin基因,不仅能诱导KB细胞凋亡,而且能介导耐药株KBv200细胞凋亡.
배경여목적:Survivin시IAPs가족적중요성원지일,연구표명가결합조망도경중적Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9억제기활성,인기종류세포적항조망작용,우기사종류세포내수화료약물유도적조망,여화료내약밀절상관.survivin재인구강표피암세포KB급기내약주KBv200균유표체,본실험의통과RNAi방법침묵survivin기인비교연구타개도KB화KBv200세포적조망작용.방법:RT-PCR법검측세포중survivin mRNA수평,류식세포의검측세포중survivin단백수평,Hoechst 33258형광염색법관찰세포형태,PI염색결합류식세포의법검측세포조망솔,이급Caspase-3활성측정시제합검측Caspase-3적활성,MTT법측정종류세포생장정황.결과:KBv200세포중survivin mRNA화단백표체량교고.전염mu6/survivin질립후48 h,KB화KBv200세포중survivin mRNA표체억제솔분별위(61.98±8.12)%화(59.29±6.32)%,단백표체억제솔분별위(44.25±5.26)%화(38.76±4.31)%.전염mu6/survivin질립후24 h、48 h、72 h,류식세포의결과현시KB화KBv200세포조망도명현증가,균재48 h조망체도고봉,이KB조망솔교고,병차Caspase-3활성야도명현증가,균재48 h체도최고.동시KB세포생장억제솔분별위(33.04±2.17)%、(56.25±3.32)%화(58.26±5.15)%,KBv200세포생장억제솔칙분별위(35.23±3.43)%、(44.90±4.12)%화(44.19±4.37)%.결론:siRNA방법능구유효침묵survivin기인,불부능유도KB세포조망,이차능개도내약주KBv200세포조망.