中国兽药杂志
中國獸藥雜誌
중국수약잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG
2007年
2期
5-9
,共5页
裴仉福%陈瑞爱%唐秀英%朱文冠%唐满华%李琳%程含波%温纳相
裴仉福%陳瑞愛%唐秀英%硃文冠%唐滿華%李琳%程含波%溫納相
배장복%진서애%당수영%주문관%당만화%리림%정함파%온납상
猪白细胞介素-18%基因表达%蛋白纯化
豬白細胞介素-18%基因錶達%蛋白純化
저백세포개소-18%기인표체%단백순화
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18.将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达.SDS-PAGE及Western-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符.将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白.
以pcDNA3.1-IL18為模闆進行PCR擴增穫得豬白細胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ雙酶切PCR產物作為供體,KpnⅠ、SacⅠ雙酶切的pET41c和pET32c作為載體,連接載體供體,轉化DH5α,經雙酶切、PCR鑒定及測序篩選齣暘性重組質粒,併命名為pET41c-IL18和pET32c-IL18.將pET41c-IL18和pET32c-IL18轉化大腸埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37 ℃誘導錶達.SDS-PAGE及Western-blotting分析結果錶明,所錶達的重組蛋白主要以包涵體形式存在,pET32c-IL18重組蛋白分子質量約33 ku,與預期大小相符.將包涵體提取物用8 mol/L脲變性,經Ni-NTA柱純化,透析複性,得到瞭純化的IL-18蛋白.
이pcDNA3.1-IL18위모판진행PCR확증획득저백세포개소-18(IL-18)적성숙태기인,이KpnⅠ、SacⅠ쌍매절PCR산물작위공체,KpnⅠ、SacⅠ쌍매절적pET41c화pET32c작위재체,련접재체공체,전화DH5α,경쌍매절、PCR감정급측서사선출양성중조질립,병명명위pET41c-IL18화pET32c-IL18.장pET41c-IL18화pET32c-IL18전화대장애희씨균BL21(DE3),용1 mmol/L IPTG 37 ℃유도표체.SDS-PAGE급Western-blotting분석결과표명,소표체적중조단백주요이포함체형식존재,pET32c-IL18중조단백분자질량약33 ku,여예기대소상부.장포함체제취물용8 mol/L뇨변성,경Ni-NTA주순화,투석복성,득도료순화적IL-18단백.
