CAJ | 학술논문

背景:自体干细胞移植治疗可以克服异体干细胞移植治疗的局限性,但目前对于进行性肌营养不良模型mdx鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及肌分化潜能研究未见报道.目的:拟建立体外分离培养mdx鼠骨髓间充质干细胞的方法,并观察其成肌分化能力.设计、时间及地点:细胞学体外观察,丁2006-01/07在中山大学附属第一医院神经病学实验宅完成.材料:4～6周龄纯系雄性mdx鼠10只,购自美国Jackson实验室,饲养于中山大学北校区动物实验中心.碱性成纤维细胞生长因子和兔抗鼠MHC抗体为Chemicon公司产晶.方法:全骨髓法体外分离mdx鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁法纯化扩增,胰酶+EDTA消化传代.取传至第3代的细胞,按1×104/孔接种于24孔板,置于含两性霉素B、碱性成纤维细胞生长因子、胎牛血清的DMEM培养基中向肌细胞方向诱导分化,2周后更换为不含两性霉素B、但添加马血清的DMEM培养基继续培养2周.主要观察指标:鼠骨髓间充质干细胞形态、表面标志、生长曲线及成肌诱导分化.结果:原代培养24 h后,鼠骨髓间充质干细胞约80%贴壁生长,第3代细胞多旱梭形,形态比较均一.鼠骨髓间充质干细胞农达CD29和CD44等间质类细胞的表面分子,不表达CD11B和CD45等淋巴造血细胞的表面分子.接种后第一两天细胞处于潜伏期,第3天细胞增殖旺盛,进入对数生长期,至第4天细胞数增长一倍,第5天进入平台期.两性霉素B诱导后细胞有少量死亡,停用后更换马血清促进细胞成肌,7～10 d可见有肌管样细胞形成,免疫荧光染色可见肌管样细胞呈MHC阳性,DAPI复染后可见肌细胞内有多个细胞核.结论:在两性霉素B与马血清依次诱导条件下,体外可成功分离培养基因缺陷mdx鼠骨髓间充质干细胞,并证明其具有成肌分化潜能.
배경:자체간세포이식치료가이극복이체간세포이식치료적국한성,단목전대우진행성기영양불량모형mdx서골수간충질간세포생물학특성급기분화잠능연구미견보도.목적:의건입체외분리배양mdx서골수간충질간세포적방법,병관찰기성기분화능력.설계、시간급지점:세포학체외관찰,정2006-01/07재중산대학부속제일의원신경병학실험택완성.재료:4～6주령순계웅성mdx서10지,구자미국Jackson실험실,사양우중산대학북교구동물실험중심.감성성섬유세포생장인자화토항서MHC항체위Chemicon공사산정.방법:전골수법체외분리mdx서골수간충질간세포,차속첩벽법순화확증,이매+EDTA소화전대.취전지제3대적세포,안1×104/공접충우24공판,치우함량성매소B、감성성섬유세포생장인자、태우혈청적DMEM배양기중향기세포방향유도분화,2주후경환위불함량성매소B、단첨가마혈청적DMEM배양기계속배양2주.주요관찰지표:서골수간충질간세포형태、표면표지、생장곡선급성기유도분화.결과:원대배양24 h후,서골수간충질간세포약80%첩벽생장,제3대세포다한사형,형태비교균일.서골수간충질간세포농체CD29화CD44등간질류세포적표면분자,불표체CD11B화CD45등림파조혈세포적표면분자.접충후제일량천세포처우잠복기,제3천세포증식왕성,진입대수생장기,지제4천세포수증장일배,제5천진입평태기.량성매소B유도후세포유소량사망,정용후경환마혈청촉진세포성기,7～10 d가견유기관양세포형성,면역형광염색가견기관양세포정MHC양성,DAPI복염후가견기세포내유다개세포핵.결론:재량성매소B여마혈청의차유도조건하,체외가성공분리배양기인결함mdx서골수간충질간세포,병증명기구유성기분화잠능.