安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
13期
5886-5888
,共3页
周雷%毛伟平%冯娟%刘洪云%魏传静%李文秀%周凤云
週雷%毛偉平%馮娟%劉洪雲%魏傳靜%李文秀%週鳳雲
주뢰%모위평%풍연%류홍운%위전정%리문수%주봉운
核糖体展示%单链抗体%肝癌%抗体库
覈糖體展示%單鏈抗體%肝癌%抗體庫
핵당체전시%단련항체%간암%항체고
[目的]构建鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库.[方法]以培养的HepG2肝癌细胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾脏分离总RNA,逆转录合成第一条链,PCR扩增重链可变区和轻链k,经linker DNA连接形成VH/k核糖体展示抗体库.将VH/k与pMD18-T载体的连接产物转化E. Coli TG1,蓝白斑筛选,挑取白色菌落,提取质粒,PCR鉴定,并测序.[结果]VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647 bp,VH/k连接产物正确,连接产物长度为1 093 bp.[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗HepG2特异性单链抗体奠定基础.
[目的]構建鼠源抗HepG2覈糖體展示抗體庫.[方法]以培養的HepG2肝癌細胞4次免疫Balb/c小鼠,取脾髒分離總RNA,逆轉錄閤成第一條鏈,PCR擴增重鏈可變區和輕鏈k,經linker DNA連接形成VH/k覈糖體展示抗體庫.將VH/k與pMD18-T載體的連接產物轉化E. Coli TG1,藍白斑篩選,挑取白色菌落,提取質粒,PCR鑒定,併測序.[結果]VH和k鏈得到正確的擴增,長度分彆為399和647 bp,VH/k連接產物正確,連接產物長度為1 093 bp.[結論]所採用的引物及反應條件能夠擴增齣目的基因,成功構建瞭鼠源抗HepG2覈糖體展示抗體庫,為進行覈糖體展示體外篩選抗HepG2特異性單鏈抗體奠定基礎.
[목적]구건서원항HepG2핵당체전시항체고.[방법]이배양적HepG2간암세포4차면역Balb/c소서,취비장분리총RNA,역전록합성제일조련,PCR확증중련가변구화경련k,경linker DNA련접형성VH/k핵당체전시항체고.장VH/k여pMD18-T재체적련접산물전화E. Coli TG1,람백반사선,도취백색균락,제취질립,PCR감정,병측서.[결과]VH화k련득도정학적확증,장도분별위399화647 bp,VH/k련접산물정학,련접산물장도위1 093 bp.[결론]소채용적인물급반응조건능구확증출목적기인,성공구건료서원항HepG2핵당체전시항체고,위진행핵당체전시체외사선항HepG2특이성단련항체전정기출.
