CAJ | 학술논문

目的建立多重16S rDNA PCR检测慢性牙周炎(CP)标本中牙龈卟啉单胞菌(Pg)、伴放线杆菌(Aa)和齿垢密螺旋体(Td),了解不同感染情况与CP严重程度的关系.方法将轻、中和重度152例CP患者牙周袋标本和30名牙周健康者龈沟标本置于200μl裂解缓冲液中,100℃水浴10 min后取10μl上清液作为聚合酶链反应(PCR)模板.常规酚-氯仿法提取的Pg ATCC33277株、AaY4株、Td FM株和E.coli DH5α株DNA分别作为PCR阳性和阴性对照.采用Pg、Aa和Td 16SrDNA特异性引物,建立多重PCR检测上述标本.3例Pg、Aa和Td PCR结果均阳性标本的目的扩增片段T-A克隆后测序.采用x2检验分析不同混合感染情况与牙周炎严重程度之间的关系.结果所建立的多重16S rDNA PCR最低可检出10个Pg、20个Aa和20个Td细胞.Pg、Aa和Td 16SrDNA扩增片段与已报道的序列比较,相似性分别高达99.45%、97.08%和96.59%.30名牙周健康者龈沟标本中,仅有1名Pg(3.3%)、2名Aa(6.7%)的16S rDNA扩增结果阳性,其余标本均阴性.152例CP患者牙周袋标本中,147例(96.7%)检出Pg、Aa和/或Td的16S rDNA,5例(3.3%)扩增结果均阴性.Pg的PCR检测阳性率(91.5%,139/152)明显高于Aa(72.4%,110/152)或Td(80.9%,123/152)(x2=7.07,18.67;P＜0.01).89.8%的患者标本有上述2种(26.5%)或3种细菌(63.3%)同时感染,且中、重度牙周炎混合感染率明显高于轻度牙周炎(x2=10.43,P＜0.01).结论所建立的多重16S rDNAPCR有较高的敏感性和特异性,可同时检测临床标本Pg、Aa和Td.CP是一种多种病原菌混合感染性疾病,病原菌协同致病作用与CP严重程度有因果关系.
목적건립다중16S rDNA PCR검측만성아주염(CP)표본중아간계람단포균(Pg)、반방선간균(Aa)화치구밀라선체(Td),료해불동감염정황여CP엄중정도적관계.방법장경、중화중도152례CP환자아주대표본화30명아주건강자간구표본치우200μl렬해완충액중,100℃수욕10 min후취10μl상청액작위취합매련반응(PCR)모판.상규분-록방법제취적Pg ATCC33277주、AaY4주、Td FM주화E.coli DH5α주DNA분별작위PCR양성화음성대조.채용Pg、Aa화Td 16SrDNA특이성인물,건립다중PCR검측상술표본.3례Pg、Aa화Td PCR결과균양성표본적목적확증편단T-A극륭후측서.채용x2검험분석불동혼합감염정황여아주염엄중정도지간적관계.결과소건립적다중16S rDNA PCR최저가검출10개Pg、20개Aa화20개Td세포.Pg、Aa화Td 16SrDNA확증편단여이보도적서렬비교,상사성분별고체99.45%、97.08%화96.59%.30명아주건강자간구표본중,부유1명Pg(3.3%)、2명Aa(6.7%)적16S rDNA확증결과양성,기여표본균음성.152례CP환자아주대표본중,147례(96.7%)검출Pg、Aa화/혹Td적16S rDNA,5례(3.3%)확증결과균음성.Pg적PCR검측양성솔(91.5%,139/152)명현고우Aa(72.4%,110/152)혹Td(80.9%,123/152)(x2=7.07,18.67;P＜0.01).89.8%적환자표본유상술2충(26.5%)혹3충세균(63.3%)동시감염,차중、중도아주염혼합감염솔명현고우경도아주염(x2=10.43,P＜0.01).결론소건립적다중16S rDNAPCR유교고적민감성화특이성,가동시검측림상표본Pg、Aa화Td.CP시일충다충병원균혼합감염성질병,병원균협동치병작용여CP엄중정도유인과관계.