眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2010年
11期
1014-1019
,共6页
视网膜色素上皮细胞%Bruch膜%微孔聚酰胺纳米纤维膜%细胞培养%组织工程
視網膜色素上皮細胞%Bruch膜%微孔聚酰胺納米纖維膜%細胞培養%組織工程
시망막색소상피세포%Bruch막%미공취선알납미섬유막%세포배양%조직공정
目的 研究人胚胎视网膜色素上皮(RPE)细胞在微孔聚酰胺纳米纤维膜(EPN)上的生长和分化情况,观察EPN能否作为一种理想的膜性支架而支持RPE细胞的生长和分化,为后续Bruch膜替代物的研究奠定基础.方法 将培养的人胚胎RPE细胞分别以5×105/cm2的密度种植在EPN和常规塑料(对照组)的Transwell植入物的24孔培养板中,低钙培养基(Ca2+浓度0.1mmol/L)中培养,待细胞贴壁生长后,改用正常钙培养基(Ca2+浓度1.8mmol/L)培养4周.用相差显微镜每天观察2组细胞的形态及生长情况;分别以免疫荧光染色及Western blot法鉴定RPE细胞中CK-18、细胞连接蛋白ZO-1及RPE65的表达,观察培养的RPE细胞遗传表型的维持情况.结果 培养在EPN上的RPE细胞与对照组一样,能够较好地贴壁生长,形成单细胞层.EPN较常规塑料更适于RPE细胞贴附生长.EPN的纤维排列类似Bruch膜内胶原层纤维排列.EPN上培养的人胚胎RPE细胞CK-18表达阳性,与对照组相比,ZO-1和RPE65均呈较强表达,较好地保持了原代RPE细胞的表型.结论 生长在EPN上的人胚胎RPE细胞能够较好地生长、分化并形成单细胞层,有效地维持了原代RPE细胞的表型.为后续Bruch膜替代物组织工程学研究提供了新的思路.
目的 研究人胚胎視網膜色素上皮(RPE)細胞在微孔聚酰胺納米纖維膜(EPN)上的生長和分化情況,觀察EPN能否作為一種理想的膜性支架而支持RPE細胞的生長和分化,為後續Bruch膜替代物的研究奠定基礎.方法 將培養的人胚胎RPE細胞分彆以5×105/cm2的密度種植在EPN和常規塑料(對照組)的Transwell植入物的24孔培養闆中,低鈣培養基(Ca2+濃度0.1mmol/L)中培養,待細胞貼壁生長後,改用正常鈣培養基(Ca2+濃度1.8mmol/L)培養4週.用相差顯微鏡每天觀察2組細胞的形態及生長情況;分彆以免疫熒光染色及Western blot法鑒定RPE細胞中CK-18、細胞連接蛋白ZO-1及RPE65的錶達,觀察培養的RPE細胞遺傳錶型的維持情況.結果 培養在EPN上的RPE細胞與對照組一樣,能夠較好地貼壁生長,形成單細胞層.EPN較常規塑料更適于RPE細胞貼附生長.EPN的纖維排列類似Bruch膜內膠原層纖維排列.EPN上培養的人胚胎RPE細胞CK-18錶達暘性,與對照組相比,ZO-1和RPE65均呈較彊錶達,較好地保持瞭原代RPE細胞的錶型.結論 生長在EPN上的人胚胎RPE細胞能夠較好地生長、分化併形成單細胞層,有效地維持瞭原代RPE細胞的錶型.為後續Bruch膜替代物組織工程學研究提供瞭新的思路.
목적 연구인배태시망막색소상피(RPE)세포재미공취선알납미섬유막(EPN)상적생장화분화정황,관찰EPN능부작위일충이상적막성지가이지지RPE세포적생장화분화,위후속Bruch막체대물적연구전정기출.방법 장배양적인배태RPE세포분별이5×105/cm2적밀도충식재EPN화상규소료(대조조)적Transwell식입물적24공배양판중,저개배양기(Ca2+농도0.1mmol/L)중배양,대세포첩벽생장후,개용정상개배양기(Ca2+농도1.8mmol/L)배양4주.용상차현미경매천관찰2조세포적형태급생장정황;분별이면역형광염색급Western blot법감정RPE세포중CK-18、세포련접단백ZO-1급RPE65적표체,관찰배양적RPE세포유전표형적유지정황.결과 배양재EPN상적RPE세포여대조조일양,능구교호지첩벽생장,형성단세포층.EPN교상규소료경괄우RPE세포첩부생장.EPN적섬유배렬유사Bruch막내효원층섬유배렬.EPN상배양적인배태RPE세포CK-18표체양성,여대조조상비,ZO-1화RPE65균정교강표체,교호지보지료원대RPE세포적표형.결론 생장재EPN상적인배태RPE세포능구교호지생장、분화병형성단세포층,유효지유지료원대RPE세포적표형.위후속Bruch막체대물조직공정학연구제공료신적사로.
