昆虫知识
昆蟲知識
곤충지식
ENTOMOLOGICAL KNOWLEDGE
2004年
2期
132-136
,共5页
安晓萌%邵红莲%杜欣军%赵小凡%王金星
安曉萌%邵紅蓮%杜訢軍%趙小凡%王金星
안효맹%소홍련%두흔군%조소범%왕금성
组织蛋白酶B%抗体制备%免疫印迹
組織蛋白酶B%抗體製備%免疫印跡
조직단백매B%항체제비%면역인적
介绍了用重组的棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)制备兔多克隆抗体的方法.用已经克隆得到的pGEX 4T-1/HCB重组质粒转化的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株进行诱导表达,获得融合表达的包涵体产物.经过变性、复性等方法处理包涵体,获得可溶性融合蛋白.用凝血酶裂解融合蛋白,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化目的蛋白HCB,用做抗原免疫家兔.产生的抗血清经硫酸铵沉淀,最后得到了抗棉铃虫组织蛋白酶B的多克隆抗体.用间接酶联免疫吸附测定法测得该抗体对重组表达的组织蛋白酶B和棉铃虫体内的组织蛋白酶B的效价分别为1∶51 200和1∶25 600.通过免疫印迹检测证明此抗体不仅可以识别重组表达的棉铃虫组织蛋白B,而且可以识别棉铃虫卵巢匀浆液中的棉铃虫组织蛋白酶B.
介紹瞭用重組的棉鈴蟲組織蛋白酶B(HCB)製備兔多剋隆抗體的方法.用已經剋隆得到的pGEX 4T-1/HCB重組質粒轉化的大腸桿菌(Escherichia coli)BL21菌株進行誘導錶達,穫得融閤錶達的包涵體產物.經過變性、複性等方法處理包涵體,穫得可溶性融閤蛋白.用凝血酶裂解融閤蛋白,再經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離純化目的蛋白HCB,用做抗原免疫傢兔.產生的抗血清經硫痠銨沉澱,最後得到瞭抗棉鈴蟲組織蛋白酶B的多剋隆抗體.用間接酶聯免疫吸附測定法測得該抗體對重組錶達的組織蛋白酶B和棉鈴蟲體內的組織蛋白酶B的效價分彆為1∶51 200和1∶25 600.通過免疫印跡檢測證明此抗體不僅可以識彆重組錶達的棉鈴蟲組織蛋白B,而且可以識彆棉鈴蟲卵巢勻漿液中的棉鈴蟲組織蛋白酶B.
개소료용중조적면령충조직단백매B(HCB)제비토다극륭항체적방법.용이경극륭득도적pGEX 4T-1/HCB중조질립전화적대장간균(Escherichia coli)BL21균주진행유도표체,획득융합표체적포함체산물.경과변성、복성등방법처리포함체,획득가용성융합단백.용응혈매렬해융합단백,재경SDS-취병희선알응효전영분리순화목적단백HCB,용주항원면역가토.산생적항혈청경류산안침정,최후득도료항면령충조직단백매B적다극륭항체.용간접매련면역흡부측정법측득해항체대중조표체적조직단백매B화면령충체내적조직단백매B적효개분별위1∶51 200화1∶25 600.통과면역인적검측증명차항체불부가이식별중조표체적면령충조직단백B,이차가이식별면령충란소균장액중적면령충조직단백매B.
