CAJ | 학술논문

目的通过与化学发光法比较,了解双色红外荧光技术在目标蛋白磷酸化检测中的优势.方法分别取内毒素休克小鼠不同时间肺组织,制备组织匀浆蛋白样品.用SDS-PAGE电泳分离后转膜,将膜分别与磷酸化的或/和总的p42/44 MAPK抗体孵育,二抗用耦联有Alexa Fluor 680和IRDye 800的荧光抗体或辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光系统和化学发光法进行蛋白质磷酸化检测.结果红外荧光检测技术和化学发光检测结果均显示内毒素处理后小鼠肺组织p42/44 MAPK磷酸化水平发生了改变,1 h最高,12 h以后逐渐恢复到接近正常水平.两种方法检测结果显示了较好的一致性,相比之下双色红外荧光技术具有更高的灵敏度、操作方便、节省时间及可以同时检测两种蛋白等优点.结论双色红外荧光技术在蛋白磷酸化的检测方面具有较好的应用前景.
목적통과여화학발광법비교,료해쌍색홍외형광기술재목표단백린산화검측중적우세.방법분별취내독소휴극소서불동시간폐조직,제비조직균장단백양품.용SDS-PAGE전영분리후전막,장막분별여린산화적혹/화총적p42/44 MAPK항체부육,이항용우련유Alexa Fluor 680화IRDye 800적형광항체혹랄근과양화물매항체,통과쌍색홍외형광계통화화학발광법진행단백질린산화검측.결과홍외형광검측기술화화학발광검측결과균현시내독소처리후소서폐조직p42/44 MAPK린산화수평발생료개변,1 h최고,12 h이후축점회복도접근정상수평.량충방법검측결과현시료교호적일치성,상비지하쌍색홍외형광기술구유경고적령민도、조작방편、절성시간급가이동시검측량충단백등우점.결론쌍색홍외형광기술재단백린산화적검측방면구유교호적응용전경.