生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
194-196
,共3页
李英辉%黄豫晓%赵亚%刘军%薛采芳
李英輝%黃豫曉%趙亞%劉軍%薛採芳
리영휘%황예효%조아%류군%설채방
靶向核糖核酸酶%原核表达%RNase活性%乙型肝炎病毒
靶嚮覈糖覈痠酶%原覈錶達%RNase活性%乙型肝炎病毒
파향핵당핵산매%원핵표체%RNase활성%을형간염병독
目的:研究原核表达的乙型肝炎病毒(HBV)靶向核糖核酸酶(RNase)及其突变体(点突变失去RNase活性)的活性.方法:将构建的靶向核糖核酸酶及其突变体基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导融合蛋白(HBV核心蛋白与人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素的融合蛋白)的表达;表达产物经包涵体纯化、SDS-PAGE和Western印迹鉴定,将纯化的蛋白用透析方法复性;以酵母tRNA为作用底物,应用复性的蛋白进行RNase活性分析.结果:纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶及其突变体;复性的HBV靶向核糖核酸酶可以降解酵母tRNA且具有剂量依赖性,而复性后的突变的靶向核糖核酸酶体不具有RNase活性.结论:原核表达的HBV靶向核糖核酸酶具有较强的RNase活性,为探索HBV靶向核糖核酸酶抑制乙肝病毒复制的机理奠定了基础.
目的:研究原覈錶達的乙型肝炎病毒(HBV)靶嚮覈糖覈痠酶(RNase)及其突變體(點突變失去RNase活性)的活性.方法:將構建的靶嚮覈糖覈痠酶及其突變體基因剋隆入原覈錶達載體pET32a(+),轉化大腸桿菌BL21(DE3),以IPTG誘導融閤蛋白(HBV覈心蛋白與人嗜痠性粒細胞來源的神經毒素的融閤蛋白)的錶達;錶達產物經包涵體純化、SDS-PAGE和Western印跡鑒定,將純化的蛋白用透析方法複性;以酵母tRNA為作用底物,應用複性的蛋白進行RNase活性分析.結果:純化和複性瞭HBV靶嚮覈糖覈痠酶及其突變體;複性的HBV靶嚮覈糖覈痠酶可以降解酵母tRNA且具有劑量依賴性,而複性後的突變的靶嚮覈糖覈痠酶體不具有RNase活性.結論:原覈錶達的HBV靶嚮覈糖覈痠酶具有較彊的RNase活性,為探索HBV靶嚮覈糖覈痠酶抑製乙肝病毒複製的機理奠定瞭基礎.
목적:연구원핵표체적을형간염병독(HBV)파향핵당핵산매(RNase)급기돌변체(점돌변실거RNase활성)적활성.방법:장구건적파향핵당핵산매급기돌변체기인극륭입원핵표체재체pET32a(+),전화대장간균BL21(DE3),이IPTG유도융합단백(HBV핵심단백여인기산성립세포래원적신경독소적융합단백)적표체;표체산물경포함체순화、SDS-PAGE화Western인적감정,장순화적단백용투석방법복성;이효모tRNA위작용저물,응용복성적단백진행RNase활성분석.결과:순화화복성료HBV파향핵당핵산매급기돌변체;복성적HBV파향핵당핵산매가이강해효모tRNA차구유제량의뢰성,이복성후적돌변적파향핵당핵산매체불구유RNase활성.결론:원핵표체적HBV파향핵당핵산매구유교강적RNase활성,위탐색HBV파향핵당핵산매억제을간병독복제적궤리전정료기출.
