医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2009年
2期
120-123,后插1
,共5页
孙守勋%李强%石妍%刘静%蒲晓允
孫守勛%李彊%石妍%劉靜%蒲曉允
손수훈%리강%석연%류정%포효윤
Toll样受体2%重组腺病毒%穿梭质粒%单个核细胞
Toll樣受體2%重組腺病毒%穿梭質粒%單箇覈細胞
Toll양수체2%중조선병독%천사질립%단개핵세포
目的:克隆人Toll样受体2(TLR2)细胞外区基因,并构建含有目的基因的重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-TLR2. 方法:应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2细胞外区基因,克隆入pUCm-T载体并转化大肠埃希菌感受态DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序分析后,用KpnⅠ和HindⅢ双酶切,将目的片段定向克隆至经相同处理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,双酶切鉴定并测序验证. 结果:RT-PCR扩增得到约1 000bp的目的基因片段,TA克隆后测序鉴定与GenBank中的序列一致,经酶切连接成功地将目的基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中. 结论:成功克隆了人TLR2细胞外区基因,并构建了含目的基因的重组腺病毒穿梭载体.
目的:剋隆人Toll樣受體2(TLR2)細胞外區基因,併構建含有目的基因的重組腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV-TLR2. 方法:應用RT-PCR方法從人外週血單箇覈細胞中擴增TLR2細胞外區基因,剋隆入pUCm-T載體併轉化大腸埃希菌感受態DH5α,提取質粒進行酶切鑒定及DNA測序分析後,用KpnⅠ和HindⅢ雙酶切,將目的片段定嚮剋隆至經相同處理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭質粒中,雙酶切鑒定併測序驗證. 結果:RT-PCR擴增得到約1 000bp的目的基因片段,TA剋隆後測序鑒定與GenBank中的序列一緻,經酶切連接成功地將目的基因插入到腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV中. 結論:成功剋隆瞭人TLR2細胞外區基因,併構建瞭含目的基因的重組腺病毒穿梭載體.
목적:극륭인Toll양수체2(TLR2)세포외구기인,병구건함유목적기인적중조선병독천사질립pAdTrack-CMV-TLR2. 방법:응용RT-PCR방법종인외주혈단개핵세포중확증TLR2세포외구기인,극륭입pUCm-T재체병전화대장애희균감수태DH5α,제취질립진행매절감정급DNA측서분석후,용KpnⅠ화HindⅢ쌍매절,장목적편단정향극륭지경상동처리적pAdTrack-CMV선병독천사질립중,쌍매절감정병측서험증. 결과:RT-PCR확증득도약1 000bp적목적기인편단,TA극륭후측서감정여GenBank중적서렬일치,경매절련접성공지장목적기인삽입도선병독천사질립pAdTrack-CMV중. 결론:성공극륭료인TLR2세포외구기인,병구건료함목적기인적중조선병독천사재체.
