中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2010年
5期
470-476
,共7页
汪惠%赖百塘%李伟英%杨学惠%张春燕%韦攀健%李金照
汪惠%賴百塘%李偉英%楊學惠%張春燕%韋攀健%李金照
왕혜%뢰백당%리위영%양학혜%장춘연%위반건%리금조
野生型p53%缺失C-末端 p53%3'端非编码区%重组腺病毒%流式细胞仪散点图%绿荧光蛋白表达
野生型p53%缺失C-末耑 p53%3'耑非編碼區%重組腺病毒%流式細胞儀散點圖%綠熒光蛋白錶達
야생형p53%결실C-말단 p53%3'단비편마구%중조선병독%류식세포의산점도%록형광단백표체
背景与目的 p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53 C-末端负调控序列的作用.本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot, FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)表达.方法 利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明.三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达.结果 测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53 C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失.Ad-(empty carrier)无p53.FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增.801D包含了不同荧光强度比率的细胞.结论 构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier).流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法.
揹景與目的 p53作為轉錄因子,在細胞應激時呈活化型,可調控細胞週期和程序性死亡抑製腫瘤生長,通常通過各種機製可使p53呈現非活化狀態,其中包括p53 C-末耑負調控序列的作用.本研究旨在製備攜帶全長和缺失這些負調控序列p53的兩種重組腺病毒,併採用流式細胞儀散點圖(flow cytometry scatter plot, FCM)檢測人肺癌細胞外源綠熒光蛋白(green fluorescence protein, GFP)錶達.方法 利用pAdEasy-Track載體繫統,構建兩種p53重組質粒併在細菌中產生重組體,轉染L293細胞產生三種重組腺病毒,測序證明.三種不同濃度病毒分彆感染人肺癌801D細胞,FCM scatter plot檢測其GFP錶達.結果 測序證明重組腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53 C-末耑終止密碼子前111箇堿基和非編碼區,Ad-p53(wtp)無p53堿基缺失.Ad-(empty carrier)無p53.FCM scatter plot顯示三種病毒感染801D細胞錶達GFP百分率接近併隨病毒濃度遞增.801D包含瞭不同熒光彊度比率的細胞.結論 構建和製備瞭去C-末耑p53和全長p53的兩種重組腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空載體Ad-(empty carrier).流式細胞儀散點圖證明該病毒試驗繫統可靠,可定量外源GFP錶達為病毒感染細胞選擇濃度提供準確方法.
배경여목적 p53작위전록인자,재세포응격시정활화형,가조공세포주기화정서성사망억제종류생장,통상통과각충궤제가사p53정현비활화상태,기중포괄p53 C-말단부조공서렬적작용.본연구지재제비휴대전장화결실저사부조공서렬p53적량충중조선병독,병채용류식세포의산점도(flow cytometry scatter plot, FCM)검측인폐암세포외원록형광단백(green fluorescence protein, GFP)표체.방법 이용pAdEasy-Track재체계통,구건량충p53중조질립병재세균중산생중조체,전염L293세포산생삼충중조선병독,측서증명.삼충불동농도병독분별감염인폐암801D세포,FCM scatter plot검측기GFP표체.결과 측서증명중조선병독:Ad-p53(del)결실p53 C-말단종지밀마자전111개감기화비편마구,Ad-p53(wtp)무p53감기결실.Ad-(empty carrier)무p53.FCM scatter plot현시삼충병독감염801D세포표체GFP백분솔접근병수병독농도체증.801D포함료불동형광강도비솔적세포.결론 구건화제비료거C-말단p53화전장p53적량충중조선병독:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)급공재체Ad-(empty carrier).류식세포의산점도증명해병독시험계통가고,가정량외원GFP표체위병독감염세포선택농도제공준학방법.
