CAJ | 학술논문

天冬酰胺合成酶B(asparagine synthetase,AS-B;EC 6.3.5.4)参与植物氮同化过程的催化与调节.在构建的盐胁迫下桑树(Morus L.)抑制消减杂交(SSH)文库中发现一个编码天冬酰胺合成酶的基因片段,采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法获得2 061 bp的全长序列,完整的开放读码框(ORF)长1 761 bp,编码586个氨基酸,预测蛋白分子质量65.66 kD,将该基因命名为桑树天冬酰胺合成酶基因(MaAS,GenBank登录号:HQ025955).序列分析显示,MaAS编码的蛋白包括2个保守的功能域(谷氨酰胺-氨基转移结构域和合成酶结构域),与其它植物天冬酰胺合成酶的氨基酸序列相似性在75%以上.将MaAS基因开放读码框连接到pET28a(+)表达载体中,转化大肠杆菌BL21后,诱导表达的MaAS重组蛋白分子质量大小与预测的分子质量一致.采用邻接法构建的桑树和其它植物基于MaAS蛋白氨基酸序列的系统进化树显示:桑树、葡萄(Vitis vinifera)、毛果杨(Populus trichocarpa)、蓖麻(Ricinus communis)聚为一类,亲缘关系较近.半定量RT-PCR分析表明,MaAS基因在桑树不同部位的转录水平存在明显差异,在盛花期的雌花中转录水平最高,尚未木质化的幼根和成熟桑椹中的转录水平较高,幼茎的茎皮和木质部中的转录水平较低,嫩叶中的转录水平很低,腋芽中的转录水平最低.
천동선알합성매B(asparagine synthetase,AS-B;EC 6.3.5.4)삼여식물담동화과정적최화여조절.재구건적염협박하상수(Morus L.)억제소감잡교(SSH)문고중발현일개편마천동선알합성매적기인편단,채용cDNA말단쾌속확증(RACE)방법획득2 061 bp적전장서렬,완정적개방독마광(ORF)장1 761 bp,편마586개안기산,예측단백분자질량65.66 kD,장해기인명명위상수천동선알합성매기인(MaAS,GenBank등록호:HQ025955).서렬분석현시,MaAS편마적단백포괄2개보수적공능역(곡안선알-안기전이결구역화합성매결구역),여기타식물천동선알합성매적안기산서렬상사성재75%이상.장MaAS기인개방독마광련접도pET28a(+)표체재체중,전화대장간균BL21후,유도표체적MaAS중조단백분자질량대소여예측적분자질량일치.채용린접법구건적상수화기타식물기우MaAS단백안기산서렬적계통진화수현시:상수、포도(Vitis vinifera)、모과양(Populus trichocarpa)、비마(Ricinus communis)취위일류,친연관계교근.반정량RT-PCR분석표명,MaAS기인재상수불동부위적전록수평존재명현차이,재성화기적자화중전록수평최고,상미목질화적유근화성숙상심중적전록수평교고,유경적경피화목질부중적전록수평교저,눈협중적전록수평흔저,액아중적전록수평최저.