解剖学研究
解剖學研究
해부학연구
ANATOMY RESEARCH
2012年
4期
245-250
,共6页
何芬%靳晓宇%邹俊涛%牛道立%杨俊华%魏旋%李建锋%姚志彬
何芬%靳曉宇%鄒俊濤%牛道立%楊俊華%魏鏇%李建鋒%姚誌彬
하분%근효우%추준도%우도립%양준화%위선%리건봉%요지빈
β-淀粉样蛋白%重组腺病毒%阿尔茨海默病%基因治疗
β-澱粉樣蛋白%重組腺病毒%阿爾茨海默病%基因治療
β-정분양단백%중조선병독%아이자해묵병%기인치료
目的 构建含有β-淀粉样蛋白( Aβ42)及核糖体进入位点(IRES)引导的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双表达重组腺病毒疫苗.方法 PCR法扩增带有IgGK轻链信号肽序列的Aβ42基因、IRES基因和小鼠GM-CSF基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中.通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒Ad-Aβ42-IRES-GMCSF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(AD-Aβ42).重组腺病毒经氯化铯密度梯度离心纯化后感染293细胞及Hela细胞,用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测Aβ42及GM-CSF在细胞内和培养液中的分泌表达.免疫动物鉴定其免疫原性.结果 pAdTrack-Aβ42-GMCSF测序结果和预期一致,纯化的AD-Aβ42感染Hela细胞后,免疫细胞化学证实Aβ42基因在Hela细胞内表达.AD-Aβ42感染293细胞后,ELISA检测培养上清中Aβ42含量为(159.87±33.26)ng/mL,GM-CSF含量为(205.45±38.20)ng/mL.免疫动物能诱导机体产生高滴度的抗Aβ抗体.结论 成功制备了AD-Aβ42,核糖体进入位点(IRES)成功引导的GM-CSF的表达,感染细胞证实其呈分泌表达,接种动物能诱导高滴度抗Aβ抗体.为老年性痴呆(AD)的基因治疗做好铺垫.
目的 構建含有β-澱粉樣蛋白( Aβ42)及覈糖體進入位點(IRES)引導的粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)雙錶達重組腺病毒疫苗.方法 PCR法擴增帶有IgGK輕鏈信號肽序列的Aβ42基因、IRES基因和小鼠GM-CSF基因,定嚮剋隆于穿梭質粒pAdTrack-CMV中.通過與腺病毒骨架載體pAdeasy-1在細菌內同源重組形成重組腺病毒質粒Ad-Aβ42-IRES-GMCSF,轉染人胚腎293細胞後包裝成有感染能力的重組腺病毒顆粒(AD-Aβ42).重組腺病毒經氯化銫密度梯度離心純化後感染293細胞及Hela細胞,用免疫細胞化學和ELISA方法分彆檢測Aβ42及GM-CSF在細胞內和培養液中的分泌錶達.免疫動物鑒定其免疫原性.結果 pAdTrack-Aβ42-GMCSF測序結果和預期一緻,純化的AD-Aβ42感染Hela細胞後,免疫細胞化學證實Aβ42基因在Hela細胞內錶達.AD-Aβ42感染293細胞後,ELISA檢測培養上清中Aβ42含量為(159.87±33.26)ng/mL,GM-CSF含量為(205.45±38.20)ng/mL.免疫動物能誘導機體產生高滴度的抗Aβ抗體.結論 成功製備瞭AD-Aβ42,覈糖體進入位點(IRES)成功引導的GM-CSF的錶達,感染細胞證實其呈分泌錶達,接種動物能誘導高滴度抗Aβ抗體.為老年性癡呆(AD)的基因治療做好鋪墊.
목적 구건함유β-정분양단백( Aβ42)급핵당체진입위점(IRES)인도적립세포-거서세포집락자격인자(GM-CSF)쌍표체중조선병독역묘.방법 PCR법확증대유IgGK경련신호태서렬적Aβ42기인、IRES기인화소서GM-CSF기인,정향극륭우천사질립pAdTrack-CMV중.통과여선병독골가재체pAdeasy-1재세균내동원중조형성중조선병독질립Ad-Aβ42-IRES-GMCSF,전염인배신293세포후포장성유감염능력적중조선병독과립(AD-Aβ42).중조선병독경록화색밀도제도리심순화후감염293세포급Hela세포,용면역세포화학화ELISA방법분별검측Aβ42급GM-CSF재세포내화배양액중적분비표체.면역동물감정기면역원성.결과 pAdTrack-Aβ42-GMCSF측서결과화예기일치,순화적AD-Aβ42감염Hela세포후,면역세포화학증실Aβ42기인재Hela세포내표체.AD-Aβ42감염293세포후,ELISA검측배양상청중Aβ42함량위(159.87±33.26)ng/mL,GM-CSF함량위(205.45±38.20)ng/mL.면역동물능유도궤체산생고적도적항Aβ항체.결론 성공제비료AD-Aβ42,핵당체진입위점(IRES)성공인도적GM-CSF적표체,감염세포증실기정분비표체,접충동물능유도고적도항Aβ항체.위노년성치태(AD)적기인치료주호포점.
