科技通报
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과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2012年
7期
46-50
,共5页
郑屹%陈赛慧%叶薇%吕建新
鄭屹%陳賽慧%葉薇%呂建新
정흘%진새혜%협미%려건신
高效液相色谱法%ATP%ADP%AMP%细胞能量代谢
高效液相色譜法%ATP%ADP%AMP%細胞能量代謝
고효액상색보법%ATP%ADP%AMP%세포능량대사
建立高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比较高糖培养的MRC-5细胞和D-半乳糖诱导的拟衰老MRC-5细胞能量代谢水平.体外培养的细胞经高氯酸裂解后,用反向HPLC法检测两组细胞ATP、ADP和AMP的含量.HPLC系统采用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流动相为15mM磷酸二氢钾缓冲液和10％甲醇,流速0.5mL/min,紫外检测波长为254nm;检测温度为25℃,进样量20μL.以标准曲线法计算ATP、ADP和AMP含量,并计算腺苷酸能荷(EC).结果显示拟衰老细胞的ATP含量及EC较对照组显著降低,而AMP含量明显升高,差异具有统计学意义(p＜0.05)；但两组之间的ADP含量没有明显差别.结果表明高效液相色谱法可检测出不同状态细胞能量物质的差异,其具有操作简便、快速、重现性好等特点,可以作为线粒体能量代谢功能的评估方法之一.
建立高效液相色譜法(HPLC)測定細胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比較高糖培養的MRC-5細胞和D-半乳糖誘導的擬衰老MRC-5細胞能量代謝水平.體外培養的細胞經高氯痠裂解後,用反嚮HPLC法檢測兩組細胞ATP、ADP和AMP的含量.HPLC繫統採用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流動相為15mM燐痠二氫鉀緩遲液和10％甲醇,流速0.5mL/min,紫外檢測波長為254nm;檢測溫度為25℃,進樣量20μL.以標準麯線法計算ATP、ADP和AMP含量,併計算腺苷痠能荷(EC).結果顯示擬衰老細胞的ATP含量及EC較對照組顯著降低,而AMP含量明顯升高,差異具有統計學意義(p＜0.05)；但兩組之間的ADP含量沒有明顯差彆.結果錶明高效液相色譜法可檢測齣不同狀態細胞能量物質的差異,其具有操作簡便、快速、重現性好等特點,可以作為線粒體能量代謝功能的評估方法之一.
건립고효액상색보법(HPLC)측정세포중ATP、ADP화AMP함량적방법,이비교고당배양적MRC-5세포화D-반유당유도적의쇠로MRC-5세포능량대사수평.체외배양적세포경고록산렬해후,용반향HPLC법검측량조세포ATP、ADP화AMP적함량.HPLC계통채용Ecosil C18반상주(4.6*250mm 5μm pH 2～8),류동상위15mM린산이경갑완충액화10％갑순,류속0.5mL/min,자외검측파장위254nm;검측온도위25℃,진양량20μL.이표준곡선법계산ATP、ADP화AMP함량,병계산선감산능하(EC).결과현시의쇠로세포적ATP함량급EC교대조조현저강저,이AMP함량명현승고,차이구유통계학의의(p＜0.05)；단량조지간적ADP함량몰유명현차별.결과표명고효액상색보법가검측출불동상태세포능량물질적차이,기구유조작간편、쾌속、중현성호등특점,가이작위선립체능량대사공능적평고방법지일.
