CAJ | 학술논문

引起早期仔猪断奶腹泻(PWED)的主要致病菌是产肠毒素型大肠杆菌(ETEC),免疫预防是防治腹泻最主要的手段.本研究采用通过大肠杆菌(Escherichia coli)表达的重组F18菌毛粘附素F(FedF)作为抗原,在小鼠(Mus musculus)中探索以此为靶标免疫防治仔猪腹泻的可能性.根据相应F18菌毛粘附素基因(fedF)设计了一对添加EcoR Ⅰ和SalⅠ酶切位点的引物,以E.coli F18为模板扩增出全长908 bp含20个信号肽序列的edF片段,并与原核表达载体pET-30a(+)连接,导入大肠杆菌BL21,得到基因工程菌E.coli [pET- fedF],后经IPTG诱导及菌液蛋白电泳分析,结果表明,大小约为32.9 kD的重组蛋白FedF可成功诱导表达；将重组工程菌口服免疫BALB/c小鼠,可有效地诱导小鼠血清中FedF特异性IgG的产生(P/N值＞2.0)及小鼠肠粘膜sIgA显著增加了2.07倍(与空载体组pET-30比较)(P＜0.05)；攻毒试验表明,口服基因工程菌E.coli [pET- fedF]可显著地有效保护小鼠免予攻毒死亡,免疫保护率可达62.5％.研究结果提示,FedF黏附蛋白基因工程菌可通过口服诱导小鼠特异的体液和粘膜免疫反应,以此保护小鼠免受产肠毒素型大肠杆菌的进攻,因而有望作为一种口服疫苗防治产肠毒素型大肠杆菌引起的仔猪腹泻.
인기조기자저단내복사(PWED)적주요치병균시산장독소형대장간균(ETEC),면역예방시방치복사최주요적수단.본연구채용통과대장간균(Escherichia coli)표체적중조F18균모점부소F(FedF)작위항원,재소서(Mus musculus)중탐색이차위파표면역방치자저복사적가능성.근거상응F18균모점부소기인(fedF)설계료일대첨가EcoR Ⅰ화SalⅠ매절위점적인물,이E.coli F18위모판확증출전장908 bp함20개신호태서렬적edF편단,병여원핵표체재체pET-30a(+)련접,도입대장간균BL21,득도기인공정균E.coli [pET- fedF],후경IPTG유도급균액단백전영분석,결과표명,대소약위32.9 kD적중조단백FedF가성공유도표체；장중조공정균구복면역BALB/c소서,가유효지유도소서혈청중FedF특이성IgG적산생(P/N치＞2.0)급소서장점막sIgA현저증가료2.07배(여공재체조pET-30비교)(P＜0.05)；공독시험표명,구복기인공정균E.coli [pET- fedF]가현저지유효보호소서면여공독사망,면역보호솔가체62.5％.연구결과제시,FedF점부단백기인공정균가통과구복유도소서특이적체액화점막면역반응,이차보호소서면수산장독소형대장간균적진공,인이유망작위일충구복역묘방치산장독소형대장간균인기적자저복사.