广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2005年
8期
1046-1048
,共3页
肖勇梅%刘移民%魏青%侯孟君%招小林%凌文华
肖勇梅%劉移民%魏青%侯孟君%招小林%凌文華
초용매%류이민%위청%후맹군%초소림%릉문화
巢式-PCR%细胞色素P450基因%T载体%测序分析
巢式-PCR%細胞色素P450基因%T載體%測序分析
소식-PCR%세포색소P450기인%T재체%측서분석
目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM-T载体.方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5a,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定,再行测序分析.结果重组质粒PCR扩增得到1568的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%.结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法,可用于基因的检测和载体的构建.
目的構建含限製性內切酶位點KpnI,XhoI的人細胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全長的pGEM-T載體.方法從培養的MCF-7細胞中抽提總RNA併根據人細胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM000499)開放閱讀框設計兩對引物,採用巢式-PCR方法擴增CYP1A1 mRNA全長,凝膠分離併迴收擴增的DNA片斷,與T載體連接後轉化大腸埃希菌DH5a,挑選3箇暘性剋隆,擴增培養後抽提重組質粒併進行PCR及酶切鑒定,再行測序分析.結果重組質粒PCR擴增得到1568的片段,KpnI,XhoI限製性內切酶消化質粒證實目的片斷成功插入至載體,測序分析也進一步證明瞭目的片段與GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性為99.9%.結論該實驗成功地構建瞭含CYP1A1基因cDNA全長區域的T載體剋隆,巢式-PCR是一種簡便、特異、靈敏的方法,可用于基因的檢測和載體的構建.
목적구건함한제성내절매위점KpnI,XhoI적인세포색소양화매(CYP1A1)기인cDNA전장적pGEM-T재체.방법종배양적MCF-7세포중추제총RNA병근거인세포색소P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM000499)개방열독광설계량대인물,채용소식-PCR방법확증CYP1A1 mRNA전장,응효분리병회수확증적DNA편단,여T재체련접후전화대장애희균DH5a,도선3개양성극륭,확증배양후추제중조질립병진행PCR급매절감정,재행측서분석.결과중조질립PCR확증득도1568적편단,KpnI,XhoI한제성내절매소화질립증실목적편단성공삽입지재체,측서분석야진일보증명료목적편단여GeneBank중CYP1A1 mRNA적서렬동원성위99.9%.결론해실험성공지구건료함CYP1A1기인cDNA전장구역적T재체극륭,소식-PCR시일충간편、특이、령민적방법,가용우기인적검측화재체적구건.
