中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
90-95
,共6页
魏义举%龙海亭%杨旭%李建芳%毕研伟%李健峰%徐维明
魏義舉%龍海亭%楊旭%李建芳%畢研偉%李健峰%徐維明
위의거%룡해정%양욱%리건방%필연위%리건봉%서유명
流感病毒%亚单位疫苗%多表位%表达纯化%抗原性
流感病毒%亞單位疫苗%多錶位%錶達純化%抗原性
류감병독%아단위역묘%다표위%표체순화%항원성
通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区M2蛋白和HA多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的45%左右.表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白.Western blot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性.为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础.
通過引物設計,利用重疊延伸PCR(OE-PCR)和搭橋PCR方法擴增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜區基因以及HA多錶位基因,分彆剋隆測序後以pET28a+為錶達載體構建重組質粒pET28a+-M2d-HA.將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),篩選穫得瞭高效錶達流感病毒缺失跨膜區M2蛋白和HA多錶位蛋白片段重組融閤蛋白的工程菌,錶達的重組蛋白約佔菌體總蛋白的45%左右.錶達的蛋白以包涵體形式存在,包涵體經親和層析和陰離子交換層析純化後複性,得到純度在90%以上的目的蛋白.Western blot結果顯示純化的重組蛋白具有較好的抗原性和特異性.為進一步研究廣譜型流感病毒亞單位疫苗奠定瞭基礎.
통과인물설계,이용중첩연신PCR(OE-PCR)화탑교PCR방법확증득도A형류감병독M2단백결실과막구기인이급HA다표위기인,분별극륭측서후이pET28a+위표체재체구건중조질립pET28a+-M2d-HA.장중조질립전화대장간균BL21(DE3),사선획득료고효표체류감병독결실과막구M2단백화HA다표위단백편단중조융합단백적공정균,표체적중조단백약점균체총단백적45%좌우.표체적단백이포함체형식존재,포함체경친화층석화음리자교환층석순화후복성,득도순도재90%이상적목적단백.Western blot결과현시순화적중조단백구유교호적항원성화특이성.위진일보연구엄보형류감병독아단위역묘전정료기출.
