南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
5期
846-848,854
,共4页
异丙酚%脂多糖%一氧化氮合酶%脐静脉内皮细胞%转录活性
異丙酚%脂多糖%一氧化氮閤酶%臍靜脈內皮細胞%轉錄活性
이병분%지다당%일양화담합매%제정맥내피세포%전록활성
目的 探讨异丙酚对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮源型一氧化氮合酶(heNOS)基因启动子转录活性的影响.方法 以基因重组技术构建heNOS基因启动子区(-1～-1600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL2-Basic,得到质粒peNOS-Luc.采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和?-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-?共转染HUVEC,用LPS、LPS+异丙酚和LPS+转移生长因子?1(TGFb1)分别刺激转染后的HUVEC,检测并比较荧光素酶/?-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、异丙酚和TGF?1对heNOS基因启动子转录活性的影响.结果 (1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在HUVEC中有效表达;(3)与未加刺激组比较,LPS刺激组heNOS启动子的转录活性降低.与LPS刺激组比较,LPS+异丙酚和LPS+TGF?1组heNOS启动子的转录活性增强.结论 异丙酚能明显增强heNOS基因启动子的转录活性,可初步证实异丙酚在转录水平通过上调heNOS基因启动子的转录活性而影响NO的生成和释放,这可能是异丙酚防治LPS诱导引起炎症反应的机制之一.
目的 探討異丙酚對脂多糖(LPS)誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)內皮源型一氧化氮閤酶(heNOS)基因啟動子轉錄活性的影響.方法 以基因重組技術構建heNOS基因啟動子區(-1～-1600 bp)驅動的螢火蟲熒光素酶報告基因載體pGL2-Basic,得到質粒peNOS-Luc.採用脂質體介導的細胞基因共轉染技術將peNOS-Luc、空載體pGL2-Basic和?-半乳糖苷酶錶達質粒pCMV-?共轉染HUVEC,用LPS、LPS+異丙酚和LPS+轉移生長因子?1(TGFb1)分彆刺激轉染後的HUVEC,檢測併比較熒光素酶/?-半乳糖苷酶活性,以確定LPS、異丙酚和TGF?1對heNOS基因啟動子轉錄活性的影響.結果 (1)酶切和測序結果均證實重組載體peNOS-Luc構建正確;(2)重組載體peNOS-Luc在HUVEC中有效錶達;(3)與未加刺激組比較,LPS刺激組heNOS啟動子的轉錄活性降低.與LPS刺激組比較,LPS+異丙酚和LPS+TGF?1組heNOS啟動子的轉錄活性增彊.結論 異丙酚能明顯增彊heNOS基因啟動子的轉錄活性,可初步證實異丙酚在轉錄水平通過上調heNOS基因啟動子的轉錄活性而影響NO的生成和釋放,這可能是異丙酚防治LPS誘導引起炎癥反應的機製之一.
목적 탐토이병분대지다당(LPS)유도인제정맥내피세포(HUVEC)내피원형일양화담합매(heNOS)기인계동자전록활성적영향.방법 이기인중조기술구건heNOS기인계동자구(-1～-1600 bp)구동적형화충형광소매보고기인재체pGL2-Basic,득도질립peNOS-Luc.채용지질체개도적세포기인공전염기술장peNOS-Luc、공재체pGL2-Basic화?-반유당감매표체질립pCMV-?공전염HUVEC,용LPS、LPS+이병분화LPS+전이생장인자?1(TGFb1)분별자격전염후적HUVEC,검측병비교형광소매/?-반유당감매활성,이학정LPS、이병분화TGF?1대heNOS기인계동자전록활성적영향.결과 (1)매절화측서결과균증실중조재체peNOS-Luc구건정학;(2)중조재체peNOS-Luc재HUVEC중유효표체;(3)여미가자격조비교,LPS자격조heNOS계동자적전록활성강저.여LPS자격조비교,LPS+이병분화LPS+TGF?1조heNOS계동자적전록활성증강.결론 이병분능명현증강heNOS기인계동자적전록활성,가초보증실이병분재전록수평통과상조heNOS기인계동자적전록활성이영향NO적생성화석방,저가능시이병분방치LPS유도인기염증반응적궤제지일.
