华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
1期
39-42
,共4页
反螺旋酶%基因敲除%单交换%重组
反螺鏇酶%基因敲除%單交換%重組
반라선매%기인고제%단교환%중조
根据同源重组的原理,构建了用于敲除冰岛硫化叶菌中反螺旋酶(RG)基因的质粒pRG.重组质粒反复转化冰岛硫化叶菌,得到质粒整合到宿主染色体上的单交换菌株,但没有获得反螺旋酶基因缺失的双交换转化子.由此推测反螺旋酶基因是冰岛硫化叶菌必需的功能基因,敲除反螺旋酶基因可导致细胞死亡,或者转化菌株为生存需要存在某种未知机制而阻止双交换发生.单交换菌株可以再次发生同源重组,通过PCR的方法,证实再次重组得到的皆为回复突变而无缺失突变菌株.
根據同源重組的原理,構建瞭用于敲除冰島硫化葉菌中反螺鏇酶(RG)基因的質粒pRG.重組質粒反複轉化冰島硫化葉菌,得到質粒整閤到宿主染色體上的單交換菌株,但沒有穫得反螺鏇酶基因缺失的雙交換轉化子.由此推測反螺鏇酶基因是冰島硫化葉菌必需的功能基因,敲除反螺鏇酶基因可導緻細胞死亡,或者轉化菌株為生存需要存在某種未知機製而阻止雙交換髮生.單交換菌株可以再次髮生同源重組,通過PCR的方法,證實再次重組得到的皆為迴複突變而無缺失突變菌株.
근거동원중조적원리,구건료용우고제빙도류화협균중반라선매(RG)기인적질립pRG.중조질립반복전화빙도류화협균,득도질립정합도숙주염색체상적단교환균주,단몰유획득반라선매기인결실적쌍교환전화자.유차추측반라선매기인시빙도류화협균필수적공능기인,고제반라선매기인가도치세포사망,혹자전화균주위생존수요존재모충미지궤제이조지쌍교환발생.단교환균주가이재차발생동원중조,통과PCR적방법,증실재차중조득도적개위회복돌변이무결실돌변균주.
