基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2010年
8期
836-842
,共7页
梁梓宇%姜海行%覃山羽%王东旭%苏思标
樑梓宇%薑海行%覃山羽%王東旭%囌思標
량재우%강해행%담산우%왕동욱%소사표
骨髓间充质干细胞%肝星状细胞%凋亡%caspase-3%BAX
骨髓間充質榦細胞%肝星狀細胞%凋亡%caspase-3%BAX
골수간충질간세포%간성상세포%조망%caspase-3%BAX
目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导大鼠肝星状细胞(HSCs)凋亡及其机制.方法 分离培养MSCs,HSC-T6系及纤维原细胞系冻融后传代使用.用6孔塑料培养板,建立上下双层细胞共培养体系.分3组:空白对照组、阴性对照组和实验组.以上体系培养观察24、48和72 h,于倒置相差显微镜下动态观察HSCs细胞形态;免疫组化法检测HSCs α-SMA表达;WST-8法检测HSCs增殖抑制率;流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法和DNA凝胶电泳(DNA Ladder)检测HSCs细胞凋亡;RT-PCR、Western blot检测HSCs caspase-3、BAX基因mRNA和蛋白表达.结果 实验组出现明显的DNA Ladder,24 ha HSCs增殖抑制率、凋亡率和caspase-3、BAX mRNA和蛋白表达呈时间依赖性显著高于对照组(P<0.01).结论 MSCs可在体外抑制HSCs增殖,可能通过旁分泌途径诱导HSCs凋亡,其凋亡发生是通过上调caspase-3、BAX表达发挥作用,本研究支持MSCs通过抑制HSCs产生而抗肝纤维化的机制.
目的 研究大鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)體外誘導大鼠肝星狀細胞(HSCs)凋亡及其機製.方法 分離培養MSCs,HSC-T6繫及纖維原細胞繫凍融後傳代使用.用6孔塑料培養闆,建立上下雙層細胞共培養體繫.分3組:空白對照組、陰性對照組和實驗組.以上體繫培養觀察24、48和72 h,于倒置相差顯微鏡下動態觀察HSCs細胞形態;免疫組化法檢測HSCs α-SMA錶達;WST-8法檢測HSCs增殖抑製率;流式細胞儀Annexin-V-FITC/PI雙染法和DNA凝膠電泳(DNA Ladder)檢測HSCs細胞凋亡;RT-PCR、Western blot檢測HSCs caspase-3、BAX基因mRNA和蛋白錶達.結果 實驗組齣現明顯的DNA Ladder,24 ha HSCs增殖抑製率、凋亡率和caspase-3、BAX mRNA和蛋白錶達呈時間依賴性顯著高于對照組(P<0.01).結論 MSCs可在體外抑製HSCs增殖,可能通過徬分泌途徑誘導HSCs凋亡,其凋亡髮生是通過上調caspase-3、BAX錶達髮揮作用,本研究支持MSCs通過抑製HSCs產生而抗肝纖維化的機製.
목적 연구대서골수간충질간세포(MSCs)체외유도대서간성상세포(HSCs)조망급기궤제.방법 분리배양MSCs,HSC-T6계급섬유원세포계동융후전대사용.용6공소료배양판,건립상하쌍층세포공배양체계.분3조:공백대조조、음성대조조화실험조.이상체계배양관찰24、48화72 h,우도치상차현미경하동태관찰HSCs세포형태;면역조화법검측HSCs α-SMA표체;WST-8법검측HSCs증식억제솔;류식세포의Annexin-V-FITC/PI쌍염법화DNA응효전영(DNA Ladder)검측HSCs세포조망;RT-PCR、Western blot검측HSCs caspase-3、BAX기인mRNA화단백표체.결과 실험조출현명현적DNA Ladder,24 ha HSCs증식억제솔、조망솔화caspase-3、BAX mRNA화단백표체정시간의뢰성현저고우대조조(P<0.01).결론 MSCs가재체외억제HSCs증식,가능통과방분비도경유도HSCs조망,기조망발생시통과상조caspase-3、BAX표체발휘작용,본연구지지MSCs통과억제HSCs산생이항간섬유화적궤제.
