化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2011年
7期
26-28,66
,共4页
刘立坚%冷艳%李雨亭%谢卫红
劉立堅%冷豔%李雨亭%謝衛紅
류립견%랭염%리우정%사위홍
甲基对硫磷水解酶%基因修饰%蛋白表达纯化
甲基對硫燐水解酶%基因脩飾%蛋白錶達純化
갑기대류린수해매%기인수식%단백표체순화
用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶(MPH)编码基因,构建了重组表达质粒pET28a-mph-lc,将其转化至大肠杆菌BL21( DE3)中进行表达.当OD600达到0.5～0.6时,用终浓度0.4mmol· L-1的IPTG在30℃下诱导表达5h,破碎离心后,利用Ni-NTA亲和层析纯化得到具有活性的融合蛋白MPH-L,即在甲基对硫磷水解酶的C端连上了一段末端为半胱氨酸的锚链.
用PCR方法穫得甲基對硫燐水解酶(MPH)編碼基因,構建瞭重組錶達質粒pET28a-mph-lc,將其轉化至大腸桿菌BL21( DE3)中進行錶達.噹OD600達到0.5～0.6時,用終濃度0.4mmol· L-1的IPTG在30℃下誘導錶達5h,破碎離心後,利用Ni-NTA親和層析純化得到具有活性的融閤蛋白MPH-L,即在甲基對硫燐水解酶的C耑連上瞭一段末耑為半胱氨痠的錨鏈.
용PCR방법획득갑기대류린수해매(MPH)편마기인,구건료중조표체질립pET28a-mph-lc,장기전화지대장간균BL21( DE3)중진행표체.당OD600체도0.5～0.6시,용종농도0.4mmol· L-1적IPTG재30℃하유도표체5h,파쇄리심후,이용Ni-NTA친화층석순화득도구유활성적융합단백MPH-L,즉재갑기대류린수해매적C단련상료일단말단위반광안산적묘련.
