中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
10期
877-880
,共4页
肠三叶因子%克隆%表达载体
腸三葉因子%剋隆%錶達載體
장삼협인자%극륭%표체재체
克隆人肠三叶因子基因TFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C 1-TFF3,并在真核细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功.将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达.结果 成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp).在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高.结论 成功构建了真核表达载体pEGFP-C1 -TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础.
剋隆人腸三葉因子基因TFF3,構建重組真覈錶達載體pEGFP-C 1-TFF3,併在真覈細胞中錶達.方法 應用逆轉錄聚閤酶鏈式反應( RT-PCR)技術,從真覈細胞中擴增得到人TFF3的全長序列,剋隆至錶達增彊型綠色熒光蛋白載體中,經酶切、PCR鑒定後測序證實剋隆成功.將重組載體轉至真覈細胞,熒光顯微鏡觀察下轉染效率,同時採用RT-PCR、Western blot技術檢測外源基因TFF3的錶達.結果 成功將hTFF3基因剋隆到真覈錶達載體中,酶切片段與預期大小一緻(200 bp).在熒光顯微鏡下觀察轉染後的細胞可見明顯的綠色熒光,RT-PCR及Western blot結果錶明:轉染後的細胞中TFF3在轉錄和翻譯水平的錶達均有明顯提高.結論 成功構建瞭真覈錶達載體pEGFP-C1 -TFF3,併在真覈細胞中顯著錶達,為進一步研究TFF3因子的生物學功能奠定瞭基礎.
극륭인장삼협인자기인TFF3,구건중조진핵표체재체pEGFP-C 1-TFF3,병재진핵세포중표체.방법 응용역전록취합매련식반응( RT-PCR)기술,종진핵세포중확증득도인TFF3적전장서렬,극륭지표체증강형록색형광단백재체중,경매절、PCR감정후측서증실극륭성공.장중조재체전지진핵세포,형광현미경관찰하전염효솔,동시채용RT-PCR、Western blot기술검측외원기인TFF3적표체.결과 성공장hTFF3기인극륭도진핵표체재체중,매절편단여예기대소일치(200 bp).재형광현미경하관찰전염후적세포가견명현적록색형광,RT-PCR급Western blot결과표명:전염후적세포중TFF3재전록화번역수평적표체균유명현제고.결론 성공구건료진핵표체재체pEGFP-C1 -TFF3,병재진핵세포중현저표체,위진일보연구TFF3인자적생물학공능전정료기출.
