CAJ | 학술논문

以紫茎泽兰暗培养幼嫩叶片为材料,在细胞核提取缓冲液中加入PVP、抗坏血酸和氨基甲酸钠3种强抗氧化剂,较好地去除了多糖多酚等次生代谢物,经低熔点琼脂糖包埋细胞核及蛋白酶K原位裂解DNA胶块,以获得大分子量DNA；最后分别采用2种不同的限制性内切酶(BamH Ⅰ和HindⅢ)和5个浓度梯度(0 U、0.2U、0.4U、0.6U、0.8 U)进行酶切,并对不同的回收方法进行比较分析.结果表明:经脉冲电泳检测,本方法提取的DNA片段长度＞600 kb,基本无细胞器DNA和蛋白质污染；酶切条件以0.4U酶浓度HindⅢ的效果最好,酶切后的DNA片段主要集中在100～300 kb之间,DNA片段大小满足构建BAC文库的要求；对回收方法进行比较分析,电洗脱法回收的大片段DNA浓度远远大于琼脂糖酶切法,大于8mg·L-1,这完全能够满足构建大片段基因组文库对DNA浓度的要求.
이자경택란암배양유눈협편위재료,재세포핵제취완충액중가입PVP、항배혈산화안기갑산납3충강항양화제,교호지거제료다당다분등차생대사물,경저용점경지당포매세포핵급단백매K원위렬해DNA효괴,이획득대분자량DNA；최후분별채용2충불동적한제성내절매(BamH Ⅰ화HindⅢ)화5개농도제도(0 U、0.2U、0.4U、0.6U、0.8 U)진행매절,병대불동적회수방법진행비교분석.결과표명:경맥충전영검측,본방법제취적DNA편단장도＞600 kb,기본무세포기DNA화단백질오염；매절조건이0.4U매농도HindⅢ적효과최호,매절후적DNA편단주요집중재100～300 kb지간,DNA편단대소만족구건BAC문고적요구；대회수방법진행비교분석,전세탈법회수적대편단DNA농도원원대우경지당매절법,대우8mg·L-1,저완전능구만족구건대편단기인조문고대DNA농도적요구.