实验动物科学
實驗動物科學
실험동물과학
LABORATORY ANIMAL SCIENCE
2012年
1期
1-5
,共5页
HSL基因%SRY基因%精子%荧光原位PCR%FITC(异硫氰酸荧光素)
HSL基因%SRY基因%精子%熒光原位PCR%FITC(異硫氰痠熒光素)
HSL기인%SRY기인%정자%형광원위PCR%FITC(이류청산형광소)
目的 精子发生是一个包括有丝分裂和减数分裂的精细调控过程,这一过程是从精原干细胞开始在雄性睾丸的曲细精管中完成的,由哺乳动物雌雄性比例接近1∶1这一现象可以推知:受精时带X基因的精子和带Y基因的精子比率应该是1∶1,但事实上精子发生的过程中,分化出来的X、Y精子的比例是否也为1∶1并不清楚,因为精子发生过程中并不是所有细胞都能最终形成精子,然而要研究雌雄出生比率就需要先研究精子本身是否严格地按照1∶1形成,因此本实验通过建立快速可靠原位PCR技术平台为进一步研究精子发生的调控过程提供支持.步骤用HSL基因优化荧光原位PCR实验方案,包括蛋白酶K作用时间和浓度,原位PCR前先对精子进行解聚,再用SRY基因对精子进行原位PCR鉴定.结果 在荧光显微镜下可清楚地看到精子头部的荧光信号,头部有绿色荧光信号的精子为带有SRY基因的Y染色体精子(Y精子),实验检测到昆明小鼠精子共493个,有信号的共273个,X∶Y=55.37％,经卡方检验,X精子与Y精子的实验结果趋近于1∶1.结论 可利用荧光原位PCR技术在单细胞水平快速鉴定精子“性别”,理论上可用于任何细胞的任何基因的鉴定.
目的 精子髮生是一箇包括有絲分裂和減數分裂的精細調控過程,這一過程是從精原榦細胞開始在雄性睪汍的麯細精管中完成的,由哺乳動物雌雄性比例接近1∶1這一現象可以推知:受精時帶X基因的精子和帶Y基因的精子比率應該是1∶1,但事實上精子髮生的過程中,分化齣來的X、Y精子的比例是否也為1∶1併不清楚,因為精子髮生過程中併不是所有細胞都能最終形成精子,然而要研究雌雄齣生比率就需要先研究精子本身是否嚴格地按照1∶1形成,因此本實驗通過建立快速可靠原位PCR技術平檯為進一步研究精子髮生的調控過程提供支持.步驟用HSL基因優化熒光原位PCR實驗方案,包括蛋白酶K作用時間和濃度,原位PCR前先對精子進行解聚,再用SRY基因對精子進行原位PCR鑒定.結果 在熒光顯微鏡下可清楚地看到精子頭部的熒光信號,頭部有綠色熒光信號的精子為帶有SRY基因的Y染色體精子(Y精子),實驗檢測到昆明小鼠精子共493箇,有信號的共273箇,X∶Y=55.37％,經卡方檢驗,X精子與Y精子的實驗結果趨近于1∶1.結論 可利用熒光原位PCR技術在單細胞水平快速鑒定精子“性彆”,理論上可用于任何細胞的任何基因的鑒定.
목적 정자발생시일개포괄유사분렬화감수분렬적정세조공과정,저일과정시종정원간세포개시재웅성고환적곡세정관중완성적,유포유동물자웅성비례접근1∶1저일현상가이추지:수정시대X기인적정자화대Y기인적정자비솔응해시1∶1,단사실상정자발생적과정중,분화출래적X、Y정자적비례시부야위1∶1병불청초,인위정자발생과정중병불시소유세포도능최종형성정자,연이요연구자웅출생비솔취수요선연구정자본신시부엄격지안조1∶1형성,인차본실험통과건립쾌속가고원위PCR기술평태위진일보연구정자발생적조공과정제공지지.보취용HSL기인우화형광원위PCR실험방안,포괄단백매K작용시간화농도,원위PCR전선대정자진행해취,재용SRY기인대정자진행원위PCR감정.결과 재형광현미경하가청초지간도정자두부적형광신호,두부유록색형광신호적정자위대유SRY기인적Y염색체정자(Y정자),실험검측도곤명소서정자공493개,유신호적공273개,X∶Y=55.37％,경잡방검험,X정자여Y정자적실험결과추근우1∶1.결론 가이용형광원위PCR기술재단세포수평쾌속감정정자“성별”,이론상가용우임하세포적임하기인적감정.
