CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨水牛精子完整质膜和破损质膜的方法对水牛单精子注射(ICSI)技术转基因效果的影响.水牛精子经冻融、Triton ×-100、超声波3种方法破损精子质膜后与外源质粒DNA混合,采用ICSI的方法将基因转染后的精子注射到水牛体外成熟卵内,观察水牛ICSI卵激活后的发育状态和外源基因的表达效果.结果表明:精子质膜完整性实验中,冻融破损精子质膜组早期胚胎基因表达率为21.8％,显著高于活精子组的5.1％(P＜0.01);冻融组与活精子组的卵裂率、囊胚发育率均无显著差异(P＞0.05).以冻融、Triton ×-100、超声波3种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(16.7％)最高,显著高于Triton×-100组(P＜0.01).同时,冻融组的早期胚胎基因表达率亦显著高于Triton×-100组和超声断尾组(60.3％vs.31.7％ vs.18.2％,P＜0.01).上述结果说明,使用ICSI技术转外源基因可获得表达EGFP基因的水牛早期胚胎;冻融精子质膜破损法能有效破损精子质膜,有利于外源DNA与精子的结合,且提高转基因效率.
본연구지재탐토수우정자완정질막화파손질막적방법대수우단정자주사(ICSI)기술전기인효과적영향.수우정자경동융、Triton ×-100、초성파3충방법파손정자질막후여외원질립DNA혼합,채용ICSI적방법장기인전염후적정자주사도수우체외성숙란내,관찰수우ICSI란격활후적발육상태화외원기인적표체효과.결과표명:정자질막완정성실험중,동융파손정자질막조조기배태기인표체솔위21.8％,현저고우활정자조적5.1％(P＜0.01);동융조여활정자조적란렬솔、낭배발육솔균무현저차이(P＞0.05).이동융、Triton ×-100、초성파3충방법파손정자질막,동융조적낭배발육솔(16.7％)최고,현저고우Triton×-100조(P＜0.01).동시,동융조적조기배태기인표체솔역현저고우Triton×-100조화초성단미조(60.3％vs.31.7％ vs.18.2％,P＜0.01).상술결과설명,사용ICSI기술전외원기인가획득표체EGFP기인적수우조기배태;동융정자질막파손법능유효파손정자질막,유리우외원DNA여정자적결합,차제고전기인효솔.