微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2003年
1期
8-14
,共7页
方六荣%肖少波%牛传双%张辉%陈焕春
方六榮%肖少波%牛傳雙%張輝%陳煥春
방륙영%초소파%우전쌍%장휘%진환춘
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),ORF5基因,GST,融合表达,免疫原性
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV),ORF5基因,GST,融閤錶達,免疫原性
저번식여호흡종합정병독(PRRSV),ORF5기인,GST,융합표체,면역원성
对杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的转座质粒pFastbac1进行改造,即在其多角体蛋白启动子下游插入谷胱苷肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase, GST)基因,构建GST融合表达转座质粒pFGST.通过转座和转染Sf9细胞,证实该系统能高水平表达GST.采用PCR方法从pMT-gp51质粒中扩增截去N端信号肽序列的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)YA株ORF5基因,并将截短的ORF5基因片段克隆到pFGST中,使之与GST融合,构建的重组转座质粒pFGST-53转染DH10Bac,提取大分子Bacmid DNA,转染Sf9细胞,获得能表达融合蛋白的高滴度重组病毒rvGST53.rvGST53感染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:与GST融合的ORF5基因在Sf9细胞中获得高效表达,表达产物分子量为45kD,能与抗PRRSV E蛋白单克隆抗体发生特异性反应.将表达产物免疫小白鼠,经间接免疫荧光检测,免疫血清能使PRRSV YA株感染的MARC-145细胞呈较强的荧光着色,证实表达的融合蛋白具有良好的免疫原性.
對桿狀病毒Bac-to-Bac錶達繫統的轉座質粒pFastbac1進行改造,即在其多角體蛋白啟動子下遊插入穀胱苷肽-S-轉移酶(glutathione-S-transferase, GST)基因,構建GST融閤錶達轉座質粒pFGST.通過轉座和轉染Sf9細胞,證實該繫統能高水平錶達GST.採用PCR方法從pMT-gp51質粒中擴增截去N耑信號肽序列的豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)YA株ORF5基因,併將截短的ORF5基因片段剋隆到pFGST中,使之與GST融閤,構建的重組轉座質粒pFGST-53轉染DH10Bac,提取大分子Bacmid DNA,轉染Sf9細胞,穫得能錶達融閤蛋白的高滴度重組病毒rvGST53.rvGST53感染Sf9細胞,SDS-PAGE和Western印跡分析錶明:與GST融閤的ORF5基因在Sf9細胞中穫得高效錶達,錶達產物分子量為45kD,能與抗PRRSV E蛋白單剋隆抗體髮生特異性反應.將錶達產物免疫小白鼠,經間接免疫熒光檢測,免疫血清能使PRRSV YA株感染的MARC-145細胞呈較彊的熒光著色,證實錶達的融閤蛋白具有良好的免疫原性.
대간상병독Bac-to-Bac표체계통적전좌질립pFastbac1진행개조,즉재기다각체단백계동자하유삽입곡광감태-S-전이매(glutathione-S-transferase, GST)기인,구건GST융합표체전좌질립pFGST.통과전좌화전염Sf9세포,증실해계통능고수평표체GST.채용PCR방법종pMT-gp51질립중확증절거N단신호태서렬적저번식여호흡종합정병독(PRRSV)YA주ORF5기인,병장절단적ORF5기인편단극륭도pFGST중,사지여GST융합,구건적중조전좌질립pFGST-53전염DH10Bac,제취대분자Bacmid DNA,전염Sf9세포,획득능표체융합단백적고적도중조병독rvGST53.rvGST53감염Sf9세포,SDS-PAGE화Western인적분석표명:여GST융합적ORF5기인재Sf9세포중획득고효표체,표체산물분자량위45kD,능여항PRRSV E단백단극륭항체발생특이성반응.장표체산물면역소백서,경간접면역형광검측,면역혈청능사PRRSV YA주감염적MARC-145세포정교강적형광착색,증실표체적융합단백구유량호적면역원성.
