中国水稻科学
中國水稻科學
중국수도과학
CHINESE JOURNAL OF RICE SCIENCE
2006年
3期
231-237
,共7页
刘朋娟%王政逸%王秋华%李德葆
劉朋娟%王政逸%王鞦華%李德葆
류붕연%왕정일%왕추화%리덕보
稻瘟病菌%根癌农杆菌介导转化%插入突变%致病缺陷突变体
稻瘟病菌%根癌農桿菌介導轉化%插入突變%緻病缺陷突變體
도온병균%근암농간균개도전화%삽입돌변%치병결함돌변체
在构建了两个含有潮霉素B磷酸转移酶基因双元载体的基础上,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌转化,转化效率达每1×106个分生孢子>300个转化子,并得到了4000多个转化子.通过继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传.Southern杂交分析表明,大约有2/3转化子的T-DNA插入是单拷贝的.用大麦叶片离体接种的方法快速测定部分稻瘟病菌转化子的致病性,发现一个致病缺陷突变体:A1-412.该突变体不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,说明A1-412突变体在寄主组织中扩展进程被阻断.进一步的表型分析发现A1-412突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的7%,在疏水表面不能形成附着胞,部分分生孢子萌发也略有延迟.Southern 杂交显示A1-412基因组中T-DNA插入是单拷贝的.上述结果表明,A1-412突变体表型的改变可能是由于T-DNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致.
在構建瞭兩箇含有潮黴素B燐痠轉移酶基因雙元載體的基礎上,成功地實現瞭農桿菌介導的稻瘟病菌轉化,轉化效率達每1×106箇分生孢子>300箇轉化子,併得到瞭4000多箇轉化子.通過繼代培養和PCR檢測,證明插入到稻瘟病菌基因組中的潮黴素抗性基因可穩定遺傳.Southern雜交分析錶明,大約有2/3轉化子的T-DNA插入是單拷貝的.用大麥葉片離體接種的方法快速測定部分稻瘟病菌轉化子的緻病性,髮現一箇緻病缺陷突變體:A1-412.該突變體不能侵入水稻葉片及抆傷的大麥或水稻葉片,說明A1-412突變體在寄主組織中擴展進程被阻斷.進一步的錶型分析髮現A1-412突變體的產孢量顯著下降,僅為野生菌株的7%,在疏水錶麵不能形成附著胞,部分分生孢子萌髮也略有延遲.Southern 雜交顯示A1-412基因組中T-DNA插入是單拷貝的.上述結果錶明,A1-412突變體錶型的改變可能是由于T-DNA插入而使某一具有重要生物學功能的基因失活所緻.
재구건료량개함유조매소B린산전이매기인쌍원재체적기출상,성공지실현료농간균개도적도온병균전화,전화효솔체매1×106개분생포자>300개전화자,병득도료4000다개전화자.통과계대배양화PCR검측,증명삽입도도온병균기인조중적조매소항성기인가은정유전.Southern잡교분석표명,대약유2/3전화자적T-DNA삽입시단고패적.용대맥협편리체접충적방법쾌속측정부분도온병균전화자적치병성,발현일개치병결함돌변체:A1-412.해돌변체불능침입수도협편급찰상적대맥혹수도협편,설명A1-412돌변체재기주조직중확전진정피조단.진일보적표형분석발현A1-412돌변체적산포량현저하강,부위야생균주적7%,재소수표면불능형성부착포,부분분생포자맹발야략유연지.Southern 잡교현시A1-412기인조중T-DNA삽입시단고패적.상술결과표명,A1-412돌변체표형적개변가능시유우T-DNA삽입이사모일구유중요생물학공능적기인실활소치.
