重组tBid融合蛋白基因的构建及其在HeLa细胞中的分泌表达
중조tBid융합단백기인적구건급기재HeLa세포중적분비표체
Construction of recombinant immuno-tBid gene and expression of a secreted fusion protein in HeLa cells
  • 万方数据
    现代肿瘤医学 현대종류의학
    JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
    2006年 11期 1334-1337 ,共4页

    裘秀春%许彦鸣%于翠娟%赵晶%孟艳玲%杨彤涛%龙华%马保安%周勇%王成济%杨安钢%范清宇

    구수춘%허언명%우취연%조정%맹염령%양동도%룡화%마보안%주용%왕성제%양안강%범청우

    tBid%HER2抗原%分泌表达 tBid%HER2抗原%分泌錶達
    tBid%HER2항원%분비표체
    目的:构建重组的Immuno-tBid基因,并检测其在HeLa细胞中的分泌表达.方法:将肿瘤表面抗原HER2的单链抗体基因与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PE253-364aa)和tBid基因连接,并在5'端连接前导肽基因,构建成Immuno-tBid(e 23 sFv-PEⅡ-tBid61/tBid76)基因.将其克隆到pCMV载体并转染HeLa细胞,G418筛选获得阳性克隆,Genomic-PCR和RT-PCR分别扩增相应的重组基因片段.建株的HeLa细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测.并通过间接免疫荧光染色和细胞计数观察建株的HeLa细胞生长和形态变化.结果:成功构建了重组的Immuno-tBid基因的真核表达载体(pCMV-e23sFv-PEⅡ(253-364)-tBid61/tBid76).稳定转染HeLa细胞,获得G418抗性的阳性HeLa细胞克隆,Genomic-PCR检测证实目的基因已整合到细胞基因组中.RT-PCR检测表明目的基因在RNA水平上的表达.细胞培养上清进行蛋白G琼脂糖凝胶免疫沉淀,Western Blot检测,证实建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白.间接免疫荧光染色和核染色结果显示,分泌Immuno-tBid蛋白的HeLa细胞呈标准的S型曲线生长,形态正常.结论:成功构建了重组的Immuno-tBid基因,建株的HeLa细胞可以通过分泌途径产生Immuno-tBid蛋白.
    목적:구건중조적Immuno-tBid기인,병검측기재HeLa세포중적분비표체.방법:장종류표면항원HER2적단련항체기인여록농간균외독소PE적전막결구역기인(PE253-364aa)화tBid기인련접,병재5'단련접전도태기인,구건성Immuno-tBid(e 23 sFv-PEⅡ-tBid61/tBid76)기인.장기극륭도pCMV재체병전염HeLa세포,G418사선획득양성극륭,Genomic-PCR화RT-PCR분별확증상응적중조기인편단.건주적HeLa세포배양상청진행단백G경지당응효면역침정,Western Blot검측.병통과간접면역형광염색화세포계수관찰건주적HeLa세포생장화형태변화.결과:성공구건료중조적Immuno-tBid기인적진핵표체재체(pCMV-e23sFv-PEⅡ(253-364)-tBid61/tBid76).은정전염HeLa세포,획득G418항성적양성HeLa세포극륭,Genomic-PCR검측증실목적기인이정합도세포기인조중.RT-PCR검측표명목적기인재RNA수평상적표체.세포배양상청진행단백G경지당응효면역침정,Western Blot검측,증실건주적HeLa세포가이통과분비도경산생Immuno-tBid단백.간접면역형광염색화핵염색결과현시,분비Immuno-tBid단백적HeLa세포정표준적S형곡선생장,형태정상.결론:성공구건료중조적Immuno-tBid기인,건주적HeLa세포가이통과분비도경산생Immuno-tBid단백.
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