CAJ | 학술논문

目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础.方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域.用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库.并在突变体片段两端引入Kpn Ⅰ位点,3'端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列.经Kpn Ⅰ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S.克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库.结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015 TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布.结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求.
목적 구건서균체전시면역구단백결합분자정점수궤돌변조합문고,위응용각충류형면역구단백대해문고진행체외분자진화사선급결구화공능적연구타하기출.방법 응용overlapping PCR제비Protein A적Z결구역.용함수궤핵감산서렬적인물,제비대Z결구역적제10、13、27、28、31화32위안기산진행수궤돌변적정점수궤돌변체고.병재돌변체편단량단인입Kpn Ⅰ위점,3'단인입3개안기산대소수궤련접태적서렬.경Kpn Ⅰ매절후수궤련접,극륭우서균립전시재체pCANTAB5S.극륭산물전화대장간균TG1,보조서균체M13K07증구,구건서균체전시정점수궤돌변조합문고.결과 해정점수궤돌변조합문고적전화자수목위6.4×106개,적도위1.4×1015 TU/L;문고중함0.72이상적양성극륭,기중유2개단결구역적양성극륭점0.15;15개양품적서렬분석현시각돌변위점화수궤련접태적안기산서렬정수궤성분포.결론 성공구건료서균체전시면역구단백결합분자정점수궤돌변조합문고,해고고용량재일급결구상구유량호적수궤성화다양성,가만족체외분자진화연구적요구.