中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2007年
7期
366-369,373
,共5页
李铁军%康楷%宋建宁%胡瓒斓%何通川%张秉强%张才全
李鐵軍%康楷%宋建寧%鬍瓚斕%何通川%張秉彊%張纔全
리철군%강해%송건저%호찬란%하통천%장병강%장재전
RNA干扰%血管内皮生长因子%肿瘤细胞%Northern杂交
RNA榦擾%血管內皮生長因子%腫瘤細胞%Northern雜交
RNA간우%혈관내피생장인자%종류세포%Northern잡교
目的:应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子(VEGF)表达.方法:将VEGF基因作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的服务,设计两个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6启动子的载体上,构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2,通过RT-PCR、Northern杂交和免疫荧光观察VEGF表达受抑的程度.结果:成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体,RT-PCR发现其在HEK293和HT29细胞系中,能明显抑制VEGF基因的表达,抑制率分别为72%和42%,但在Hela和HepG2细胞中的抑制率仅为28%和13%;Norrhern杂交显示,在HEK293细胞和HT29细胞中,VEGF mRNA明显受抑,抑制率达88%和89%;免疫荧光显示,在HT29细胞中,VEGF蛋白表达的受抑制率为73%.结论:针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达,但在不同细胞系中的作用强度存在差别.
目的:應用RNA榦擾技術抑製血管內皮生長因子(VEGF)錶達.方法:將VEGF基因作為RNA榦擾的靶區,通過E-RNAi網上提供的服務,設計兩箇特異的RNA榦擾序列,將其裝入含U6啟動子的載體上,構建成抗VEGF基因的小髮夾樣RNA(shRNA)錶達載體,再轉染人胚腎細胞HEK293、結腸癌細胞HT29、宮頸癌細胞Hela和肝癌細胞HepG2,通過RT-PCR、Northern雜交和免疫熒光觀察VEGF錶達受抑的程度.結果:成功構建瞭兩種抗VEGF基因的shRNA錶達載體,RT-PCR髮現其在HEK293和HT29細胞繫中,能明顯抑製VEGF基因的錶達,抑製率分彆為72%和42%,但在Hela和HepG2細胞中的抑製率僅為28%和13%;Norrhern雜交顯示,在HEK293細胞和HT29細胞中,VEGF mRNA明顯受抑,抑製率達88%和89%;免疫熒光顯示,在HT29細胞中,VEGF蛋白錶達的受抑製率為73%.結論:針對VEGF基因的shRNA錶達載體能夠明顯抑製VEGF基因的錶達,但在不同細胞繫中的作用彊度存在差彆.
목적:응용RNA간우기술억제혈관내피생장인자(VEGF)표체.방법:장VEGF기인작위RNA간우적파구,통과E-RNAi망상제공적복무,설계량개특이적RNA간우서렬,장기장입함U6계동자적재체상,구건성항VEGF기인적소발협양RNA(shRNA)표체재체,재전염인배신세포HEK293、결장암세포HT29、궁경암세포Hela화간암세포HepG2,통과RT-PCR、Northern잡교화면역형광관찰VEGF표체수억적정도.결과:성공구건료량충항VEGF기인적shRNA표체재체,RT-PCR발현기재HEK293화HT29세포계중,능명현억제VEGF기인적표체,억제솔분별위72%화42%,단재Hela화HepG2세포중적억제솔부위28%화13%;Norrhern잡교현시,재HEK293세포화HT29세포중,VEGF mRNA명현수억,억제솔체88%화89%;면역형광현시,재HT29세포중,VEGF단백표체적수억제솔위73%.결론:침대VEGF기인적shRNA표체재체능구명현억제VEGF기인적표체,단재불동세포계중적작용강도존재차별.
