吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2007年
6期
982-985
,共4页
徐波%郑永晨%费邵阳%高航
徐波%鄭永晨%費邵暘%高航
서파%정영신%비소양%고항
血红素氧化酶(脱环)%克隆分子%原核表达
血紅素氧化酶(脫環)%剋隆分子%原覈錶達
혈홍소양화매(탈배)%극륭분자%원핵표체
目的:从大鼠脾中克隆出血红素氧化酶1(RHO-1)基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中表达其蛋白.方法:用RT-PCR从大鼠脾总RNA中扩增出RHO-1 cDNA,并将其克隆入pMD18-T载体,经TA克隆测序分析后,将阳性TA克隆RHO-1片段亚克隆入pET28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经限制性内切酶图谱鉴定后,阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析.结果:TA克隆测序分析证实该基因全长870 bp,编码289个氨基酸,所克隆的基因序列与GenBank中登录的RHO-1基因序列完全一致;限制性内切酶图谱结果表明成功构建了RHO-1的原核表达载体;SDS-PAGE结果显示RHO-1基因在大肠杆菌中获得表达.结论:用RT-PCR正确克隆RHO-1基因,构建pET28a(+)/RHO-1表达载体,并成功表达RHO-1融合蛋白.
目的:從大鼠脾中剋隆齣血紅素氧化酶1(RHO-1)基因,構建其原覈錶達載體,併在大腸桿菌中錶達其蛋白.方法:用RT-PCR從大鼠脾總RNA中擴增齣RHO-1 cDNA,併將其剋隆入pMD18-T載體,經TA剋隆測序分析後,將暘性TA剋隆RHO-1片段亞剋隆入pET28a(+)原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL-21,經限製性內切酶圖譜鑒定後,暘性菌株經IPTG誘導,SDS-PAGE分析.結果:TA剋隆測序分析證實該基因全長870 bp,編碼289箇氨基痠,所剋隆的基因序列與GenBank中登錄的RHO-1基因序列完全一緻;限製性內切酶圖譜結果錶明成功構建瞭RHO-1的原覈錶達載體;SDS-PAGE結果顯示RHO-1基因在大腸桿菌中穫得錶達.結論:用RT-PCR正確剋隆RHO-1基因,構建pET28a(+)/RHO-1錶達載體,併成功錶達RHO-1融閤蛋白.
목적:종대서비중극륭출혈홍소양화매1(RHO-1)기인,구건기원핵표체재체,병재대장간균중표체기단백.방법:용RT-PCR종대서비총RNA중확증출RHO-1 cDNA,병장기극륭입pMD18-T재체,경TA극륭측서분석후,장양성TA극륭RHO-1편단아극륭입pET28a(+)원핵표체재체,전화대장간균BL-21,경한제성내절매도보감정후,양성균주경IPTG유도,SDS-PAGE분석.결과:TA극륭측서분석증실해기인전장870 bp,편마289개안기산,소극륭적기인서렬여GenBank중등록적RHO-1기인서렬완전일치;한제성내절매도보결과표명성공구건료RHO-1적원핵표체재체;SDS-PAGE결과현시RHO-1기인재대장간균중획득표체.결론:용RT-PCR정학극륭RHO-1기인,구건pET28a(+)/RHO-1표체재체,병성공표체RHO-1융합단백.
