延边大学医学学报
延邊大學醫學學報
연변대학의학학보
JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE YANBIAN UNIVERSTIY
2008年
1期
5-9
,共5页
李强%魏晶%韩晓敏%李辉%穆永佳%李红花%李英信%孟繁平
李彊%魏晶%韓曉敏%李輝%穆永佳%李紅花%李英信%孟繁平
리강%위정%한효민%리휘%목영가%리홍화%리영신%맹번평
重症肌无力%抗体%真核表达载体
重癥肌無力%抗體%真覈錶達載體
중증기무력%항체%진핵표체재체
[目的]构建抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体,为单链抗体A7基因的真核表达及基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]应用PCR技术,从已构建的含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的重组原核表达载体pHEN2单链抗体A7上扩增单链抗体A7基因并纯化,将纯化后的PCR产物经EcoRⅠ和AvrⅡ双酶切后,用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收并纯化,再与经同样酶切并纯化的真核表达载体pPIC9K连接,将其产物转化至大肠杆菌DH5α后扩增,再用AvrⅡ和EcoRⅠ酶切和测定序列检查ScFvA7基因插入的准确性. [结果]构建pPIC9K-ScFvA7重组载体,经序列测定检查核苷酸序列正确,且ScFvA7基因准确地克隆至载体开放读码框架内.[结论]成功地构建了抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A7基因的真核表达载体.
[目的]構建抗乙酰膽堿受體主要免疫原區單鏈抗體A7基因的真覈錶達載體,為單鏈抗體A7基因的真覈錶達及基因治療重癥肌無力奠定基礎.[方法]應用PCR技術,從已構建的含有抗乙酰膽堿受體主要免疫原區單鏈抗體A7基因的重組原覈錶達載體pHEN2單鏈抗體A7上擴增單鏈抗體A7基因併純化,將純化後的PCR產物經EcoRⅠ和AvrⅡ雙酶切後,用低鎔點瓊脂糖凝膠電泳迴收併純化,再與經同樣酶切併純化的真覈錶達載體pPIC9K連接,將其產物轉化至大腸桿菌DH5α後擴增,再用AvrⅡ和EcoRⅠ酶切和測定序列檢查ScFvA7基因插入的準確性. [結果]構建pPIC9K-ScFvA7重組載體,經序列測定檢查覈苷痠序列正確,且ScFvA7基因準確地剋隆至載體開放讀碼框架內.[結論]成功地構建瞭抗乙酰膽堿受體主要免疫原區單鏈抗體A7基因的真覈錶達載體.
[목적]구건항을선담감수체주요면역원구단련항체A7기인적진핵표체재체,위단련항체A7기인적진핵표체급기인치료중증기무력전정기출.[방법]응용PCR기술,종이구건적함유항을선담감수체주요면역원구단련항체A7기인적중조원핵표체재체pHEN2단련항체A7상확증단련항체A7기인병순화,장순화후적PCR산물경EcoRⅠ화AvrⅡ쌍매절후,용저용점경지당응효전영회수병순화,재여경동양매절병순화적진핵표체재체pPIC9K련접,장기산물전화지대장간균DH5α후확증,재용AvrⅡ화EcoRⅠ매절화측정서렬검사ScFvA7기인삽입적준학성. [결과]구건pPIC9K-ScFvA7중조재체,경서렬측정검사핵감산서렬정학,차ScFvA7기인준학지극륭지재체개방독마광가내.[결론]성공지구건료항을선담감수체주요면역원구단련항체A7기인적진핵표체재체.
