中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
7期
580-583
,共4页
熊建军%周英妹%干丽君%龚帧%林玲
熊建軍%週英妹%榦麗君%龔幀%林玲
웅건군%주영매%간려군%공정%림령
USP22基因%启动子%报告基因
USP22基因%啟動子%報告基因
USP22기인%계동자%보고기인
目的克隆原癌基因USP22部分启动子序列,探讨其转录活性.方法应用cDNA 5＇末端快速扩增(5′RACE)方法定位USP22基因转录起始点；在此基础上针对其5＇端非编码区处包括转录起始点在内的-2 828～+52片段进行PCR扩增,产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic.重组质粒与内参质粒pRL-TK共转染HepG2与Hela细胞,双荧光素酶活性检测确定其转录活性.结果成功确定USP22基因转录起始位点,酶切及测序结果证实USP22基因5＇端非编码区2 880 bp序列正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic.重组质粒pGL3-USP22 promoter转染HepG2细胞和Hela细胞后,检测到荧光素酶的高表达(P＜0.05).结论 成功构建具有转录活性的USP22启动子片段,为进一步研究USP22表达调控机制奠定基础.
目的剋隆原癌基因USP22部分啟動子序列,探討其轉錄活性.方法應用cDNA 5＇末耑快速擴增(5′RACE)方法定位USP22基因轉錄起始點；在此基礎上針對其5＇耑非編碼區處包括轉錄起始點在內的-2 828～+52片段進行PCR擴增,產物剋隆入熒光素酶錶達載體pGL3-Basic.重組質粒與內參質粒pRL-TK共轉染HepG2與Hela細胞,雙熒光素酶活性檢測確定其轉錄活性.結果成功確定USP22基因轉錄起始位點,酶切及測序結果證實USP22基因5＇耑非編碼區2 880 bp序列正確插入到熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic.重組質粒pGL3-USP22 promoter轉染HepG2細胞和Hela細胞後,檢測到熒光素酶的高錶達(P＜0.05).結論 成功構建具有轉錄活性的USP22啟動子片段,為進一步研究USP22錶達調控機製奠定基礎.
목적극륭원암기인USP22부분계동자서렬,탐토기전록활성.방법응용cDNA 5＇말단쾌속확증(5′RACE)방법정위USP22기인전록기시점；재차기출상침대기5＇단비편마구처포괄전록기시점재내적-2 828～+52편단진행PCR확증,산물극륭입형광소매표체재체pGL3-Basic.중조질립여내삼질립pRL-TK공전염HepG2여Hela세포,쌍형광소매활성검측학정기전록활성.결과성공학정USP22기인전록기시위점,매절급측서결과증실USP22기인5＇단비편마구2 880 bp서렬정학삽입도형광소매보고기인재체pGL3-Basic.중조질립pGL3-USP22 promoter전염HepG2세포화Hela세포후,검측도형광소매적고표체(P＜0.05).결론 성공구건구유전록활성적USP22계동자편단,위진일보연구USP22표체조공궤제전정기출.
