CAJ | 학술논문

目的:建立一种高效的筛选跨膜受体靶向肽的噬菌体展示新方法,据此筛选出组织因子( TF) 高亲和力靶向肽.方法:分别以纯化TF蛋白和具有TF高特异性表达的结直肠癌细胞株HT-29为靶标,用噬菌体七肽库进行序贯筛选(受体-细胞序贯筛选法,STRCA法),ELISA初步鉴定噬菌体克隆对HT-29亲和力.对噬菌体克隆进行测序,利用竞争抑制 ELISA比较各合成肽的TF结合力.重复实验检测筛选结果的可靠性.结果:经过5轮筛选,与TF结合的噬菌体得到了富集,回收率由(2.25×10-4)%增加到(1.32×10-2)%;ELISA结果显示30个克隆中,阳性率为76.7%.噬菌体测序结果中,4种合成肽(分别命名为A、B、C、D肽)中A肽序列重复率为23.3%(7/30),B肽为23.3%(7/30),C肽为26.7%(8/30),D肽为10.0%(3/30);E肽为A、B肽合成的复合靶向肽.经竞争抑制 ELISA比较5种肽的TF亲和力,其IC50分别为3.25 nmol/L、6.72 mol/L、3.24×103 mol/L、2.08×102 mol/L和45.77 mol/L.重复实验所获得的阳性噬菌体克隆序列与第1次实验相比,重复率为33.3%.结论:STRCA法是一种理想的筛选跨膜受体靶向肽方法,采用该法获得的TF靶向肽对TF具有高度的亲和力.
목적:건립일충고효적사선과막수체파향태적서균체전시신방법,거차사선출조직인자( TF) 고친화력파향태.방법:분별이순화TF단백화구유TF고특이성표체적결직장암세포주HT-29위파표,용서균체칠태고진행서관사선(수체-세포서관사선법,STRCA법),ELISA초보감정서균체극륭대HT-29친화력.대서균체극륭진행측서,이용경쟁억제 ELISA비교각합성태적TF결합력.중복실험검측사선결과적가고성.결과:경과5륜사선,여TF결합적서균체득도료부집,회수솔유(2.25×10-4)%증가도(1.32×10-2)%;ELISA결과현시30개극륭중,양성솔위76.7%.서균체측서결과중,4충합성태(분별명명위A、B、C、D태)중A태서렬중복솔위23.3%(7/30),B태위23.3%(7/30),C태위26.7%(8/30),D태위10.0%(3/30);E태위A、B태합성적복합파향태.경경쟁억제 ELISA비교5충태적TF친화력,기IC50분별위3.25 nmol/L、6.72 mol/L、3.24×103 mol/L、2.08×102 mol/L화45.77 mol/L.중복실험소획득적양성서균체극륭서렬여제1차실험상비,중복솔위33.3%.결론:STRCA법시일충이상적사선과막수체파향태방법,채용해법획득적TF파향태대TF구유고도적친화력.