实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
13期
987-989,993
,共4页
秦大妮%周泽民%沈惠平%余章斌%韩树萍
秦大妮%週澤民%瀋惠平%餘章斌%韓樹萍
진대니%주택민%침혜평%여장빈%한수평
WNT1%P19细胞%pGL3-Basic%基因表达载体构建%萤火虫荧光素酶
WNT1%P19細胞%pGL3-Basic%基因錶達載體構建%螢火蟲熒光素酶
WNT1%P19세포%pGL3-Basic%기인표체재체구건%형화충형광소매
目的 构建小鼠WNT1基因启动子控制的萤火虫荧光索酶表达载体,并检测其在P19细胞中的表达.方法 采用PCR方法获得WNT1基因启动子最小功能单位和3'UTR区域在内的DNA片段.双酶切后插入到pGL3-Basic载体中构成重组表达载体,使萤火虫荧光素酶报告基因的表达受WNT1启动子控制.将构建的重组表达载体或pGL3-Basic载体分别与内参质粒pRL-SV40(表达海肾荧光素酶)共转染P19细胞,24h后用双荧光检测试剂盒测定萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶活性.结果 重组表达载体经双酶切及测序鉴定证明构建正确,空白对照组(荧光强度比值:2.8204±0.2944)与对照组(荧光强度比值:3.0508±0.3037)及WNT-3' UTR突变组(荧光强度比值:51.4758±0.9837)比较,差异均有统计学意义(Pa＜0.001),该重组表达载体在P19细胞特异性高表达萤火虫荧光素酶.结论 成功构建小鼠WNT1基因启动子控制的萤火虫荧光素酶表达载体,并检测到该载体在P19细胞的特异性表达.
目的 構建小鼠WNT1基因啟動子控製的螢火蟲熒光索酶錶達載體,併檢測其在P19細胞中的錶達.方法 採用PCR方法穫得WNT1基因啟動子最小功能單位和3'UTR區域在內的DNA片段.雙酶切後插入到pGL3-Basic載體中構成重組錶達載體,使螢火蟲熒光素酶報告基因的錶達受WNT1啟動子控製.將構建的重組錶達載體或pGL3-Basic載體分彆與內參質粒pRL-SV40(錶達海腎熒光素酶)共轉染P19細胞,24h後用雙熒光檢測試劑盒測定螢火蟲熒光素酶及海腎熒光素酶活性.結果 重組錶達載體經雙酶切及測序鑒定證明構建正確,空白對照組(熒光彊度比值:2.8204±0.2944)與對照組(熒光彊度比值:3.0508±0.3037)及WNT-3' UTR突變組(熒光彊度比值:51.4758±0.9837)比較,差異均有統計學意義(Pa＜0.001),該重組錶達載體在P19細胞特異性高錶達螢火蟲熒光素酶.結論 成功構建小鼠WNT1基因啟動子控製的螢火蟲熒光素酶錶達載體,併檢測到該載體在P19細胞的特異性錶達.
목적 구건소서WNT1기인계동자공제적형화충형광색매표체재체,병검측기재P19세포중적표체.방법 채용PCR방법획득WNT1기인계동자최소공능단위화3'UTR구역재내적DNA편단.쌍매절후삽입도pGL3-Basic재체중구성중조표체재체,사형화충형광소매보고기인적표체수WNT1계동자공제.장구건적중조표체재체혹pGL3-Basic재체분별여내삼질립pRL-SV40(표체해신형광소매)공전염P19세포,24h후용쌍형광검측시제합측정형화충형광소매급해신형광소매활성.결과 중조표체재체경쌍매절급측서감정증명구건정학,공백대조조(형광강도비치:2.8204±0.2944)여대조조(형광강도비치:3.0508±0.3037)급WNT-3' UTR돌변조(형광강도비치:51.4758±0.9837)비교,차이균유통계학의의(Pa＜0.001),해중조표체재체재P19세포특이성고표체형화충형광소매.결론 성공구건소서WNT1기인계동자공제적형화충형광소매표체재체,병검측도해재체재P19세포적특이성표체.
