中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2004年
1期
22-26
,共5页
党志胜%罗建勋%蒋锡仕%黄孝玢%白启%殷宏
黨誌勝%囉建勛%蔣錫仕%黃孝玢%白啟%慇宏
당지성%라건훈%장석사%황효분%백계%은굉
环形泰勒虫%表面蛋白基因%高免疫原性区%克隆%表达
環形泰勒蟲%錶麵蛋白基因%高免疫原性區%剋隆%錶達
배형태륵충%표면단백기인%고면역원성구%극륭%표체
根据环形泰勒虫TaA1272-1株裂殖体表面抗原(TaSP)基因的序列设计了1对引物,用PCR扩增出该基因长为393 bp的高免疫原性区片段(SBxp).将扩增产物连接到pGEM-T Easy载体上,转化入大肠埃希氏菌JM109中进行克隆.随后将重组质粒pGEM-SBxp和表达载体pGEX-4T-1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后,将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体pGEX-4T-1-SBxp,并将其转化到BL21宿主菌中.提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后,阳性克隆用IPTG诱导表达.收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blotting检测.结果,SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达,其表达产物为分子质量43 ku的融合蛋白,该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别.
根據環形泰勒蟲TaA1272-1株裂殖體錶麵抗原(TaSP)基因的序列設計瞭1對引物,用PCR擴增齣該基因長為393 bp的高免疫原性區片段(SBxp).將擴增產物連接到pGEM-T Easy載體上,轉化入大腸埃希氏菌JM109中進行剋隆.隨後將重組質粒pGEM-SBxp和錶達載體pGEX-4T-1分彆以BamHⅠ、XhoⅠ酶切後,將酶切的目的片段SBxp亞剋隆到原覈錶達載體中構建瞭重組錶達載體pGEX-4T-1-SBxp,併將其轉化到BL21宿主菌中.提取重組質粒經BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鑒定和測序確證後,暘性剋隆用IPTG誘導錶達.收集不同時間的菌液進行SDS-PAGE電泳和Western blotting檢測.結果,SBxp基因在大腸埃希氏菌中成功錶達,其錶達產物為分子質量43 ku的融閤蛋白,該產物能被牛環形泰勒蟲暘性血清所識彆.
근거배형태륵충TaA1272-1주렬식체표면항원(TaSP)기인적서렬설계료1대인물,용PCR확증출해기인장위393 bp적고면역원성구편단(SBxp).장확증산물련접도pGEM-T Easy재체상,전화입대장애희씨균JM109중진행극륭.수후장중조질립pGEM-SBxp화표체재체pGEX-4T-1분별이BamHⅠ、XhoⅠ매절후,장매절적목적편단SBxp아극륭도원핵표체재체중구건료중조표체재체pGEX-4T-1-SBxp,병장기전화도BL21숙주균중.제취중조질립경BamHⅠ、XhoⅠ매절、PCR감정화측서학증후,양성극륭용IPTG유도표체.수집불동시간적균액진행SDS-PAGE전영화Western blotting검측.결과,SBxp기인재대장애희씨균중성공표체,기표체산물위분자질량43 ku적융합단백,해산물능피우배형태륵충양성혈청소식별.
