CAJ | 학술논문

背景与目的:已有研究表明细菌氧化还原蛋白azurin,在体外和荷瘤裸鼠体内可选择性的抑制某些黑色素瘤细胞和人乳腺癌细胞增殖并诱导和激发肿瘤细胞的凋亡,同时发现azurin在荷瘤裸鼠体内诱导肿瘤凋亡使肿瘤体积明显减小,但未发现毒副作用.azurin如何诱导肿瘤细胞凋亡从而达到治疗肿瘤的机制目前仍不明确.本研究旨在探讨azurin对人骨肉瘤U2OS细胞诱导凋亡作用及其可能的分子机制.方法:以不同浓度的azurin培养U2OS细胞.通过MTT法测细胞活性,用Bliss法计算IC50值,荧光显微镜、电镜观察亚细胞结构和凋亡小体形成,琼脂糖凝胶电泳观察DNA"ladder"形成,流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,Western blot检测细胞Bax、Bcl-2和caspase-3表达情况.结果:细菌氧化还原蛋白azurin能选择性抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长且呈浓度依赖关系并能诱导细胞凋亡,IC50值为(114.54±7.65)mg/L,均高于相同浓度组的人骨肉瘤细胞MG63及正常人肝细胞L-02细胞组(P＜0.05).100 mg/L和200 mg/L azurin作用24 h后,AO、Hoechst 33258和透射电镜见较多的凋亡细胞,出现凋亡小体,部分细胞坏死.琼脂糖凝胶电泳见典型的"ladder",Annexin-V/PI的FCM检测azurin作用3 h就出现凋亡现象,200 mg/L的azurin作用48 h时凋亡指数达到峰值35.8%,细胞停滞于G1期,而对照组则无明显的凋亡细胞出现;Western blot发现azurin的浓度增加后,细胞Bax表达升高,caspase-3裂解激活,而Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论:Aazurin可选择性诱导人骨肉瘤U2OS细胞的凋亡,且存在明显的时效量效关系.其分子机制可能是通过下调Bcl-2的表达和上调Bax蛋白表达,激活caspase-3进而通过一系列凋亡级连反应而实现的.
배경여목적:이유연구표명세균양화환원단백azurin,재체외화하류라서체내가선택성적억제모사흑색소류세포화인유선암세포증식병유도화격발종류세포적조망,동시발현azurin재하류라서체내유도종류조망사종류체적명현감소,단미발현독부작용.azurin여하유도종류세포조망종이체도치료종류적궤제목전잉불명학.본연구지재탐토azurin대인골육류U2OS세포유도조망작용급기가능적분자궤제.방법:이불동농도적azurin배양U2OS세포.통과MTT법측세포활성,용Bliss법계산IC50치,형광현미경、전경관찰아세포결구화조망소체형성,경지당응효전영관찰DNA"ladder"형성,류식세포의검측세포조망발생솔,Western blot검측세포Bax、Bcl-2화caspase-3표체정황.결과:세균양화환원단백azurin능선택성억제인골육류U2OS세포생장차정농도의뢰관계병능유도세포조망,IC50치위(114.54±7.65)mg/L,균고우상동농도조적인골육류세포MG63급정상인간세포L-02세포조(P＜0.05).100 mg/L화200 mg/L azurin작용24 h후,AO、Hoechst 33258화투사전경견교다적조망세포,출현조망소체,부분세포배사.경지당응효전영견전형적"ladder",Annexin-V/PI적FCM검측azurin작용3 h취출현조망현상,200 mg/L적azurin작용48 h시조망지수체도봉치35.8%,세포정체우G1기,이대조조칙무명현적조망세포출현;Western blot발현azurin적농도증가후,세포Bax표체승고,caspase-3렬해격활,이Bcl-2단백표체축점강저.결론:Aazurin가선택성유도인골육류U2OS세포적조망,차존재명현적시효량효관계.기분자궤제가능시통과하조Bcl-2적표체화상조Bax단백표체,격활caspase-3진이통과일계렬조망급련반응이실현적.