生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2005年
9期
850-856
,共7页
蒋琳%冯静%吴文芳%杨东玲%阎锡蕴
蔣琳%馮靜%吳文芳%楊東玲%閻錫蘊
장림%풍정%오문방%양동령%염석온
抗HER2/neu单链抗体%人肿瘤坏死因子%免疫毒素
抗HER2/neu單鏈抗體%人腫瘤壞死因子%免疫毒素
항HER2/neu단련항체%인종류배사인자%면역독소
HER2/neu基因在肿瘤中的过度表达使其成为许多肿瘤的标志分子.为了增加过度表达HER2/neu的肿瘤细胞对肿瘤坏死因子(TNF)的敏感性和提高HER2/neu抗体的肿瘤杀伤效应,将抗HER2/neu单链抗体C6.5与人肿瘤坏死因子hTNF-α融合,构建了scFvC6.5-hTNF-α融合蛋白,完成了重组蛋白在大肠杆菌中的表达,产率为400μg/L菌液.经过亲和层析和柱复性,融合蛋白的纯度达95%以上.ELISA试验表明,scFvC6.5-hTNF-α能够特异结合HER2/neu阳性卵巢癌细胞SKOV-3和乳腺癌细胞MCF-7,而不结合HER2/neu阴性的黑色素瘤细胞A375.MTT试验表明,scFvC6.5-hTNF-α能够选择性地杀伤SKOV-3和MCF-7细胞,而不影响A375细胞的生长.这种肿瘤细胞特异性杀伤作用提示该免疫毒素具有肿瘤靶向治疗的潜在应用价值.
HER2/neu基因在腫瘤中的過度錶達使其成為許多腫瘤的標誌分子.為瞭增加過度錶達HER2/neu的腫瘤細胞對腫瘤壞死因子(TNF)的敏感性和提高HER2/neu抗體的腫瘤殺傷效應,將抗HER2/neu單鏈抗體C6.5與人腫瘤壞死因子hTNF-α融閤,構建瞭scFvC6.5-hTNF-α融閤蛋白,完成瞭重組蛋白在大腸桿菌中的錶達,產率為400μg/L菌液.經過親和層析和柱複性,融閤蛋白的純度達95%以上.ELISA試驗錶明,scFvC6.5-hTNF-α能夠特異結閤HER2/neu暘性卵巢癌細胞SKOV-3和乳腺癌細胞MCF-7,而不結閤HER2/neu陰性的黑色素瘤細胞A375.MTT試驗錶明,scFvC6.5-hTNF-α能夠選擇性地殺傷SKOV-3和MCF-7細胞,而不影響A375細胞的生長.這種腫瘤細胞特異性殺傷作用提示該免疫毒素具有腫瘤靶嚮治療的潛在應用價值.
HER2/neu기인재종류중적과도표체사기성위허다종류적표지분자.위료증가과도표체HER2/neu적종류세포대종류배사인자(TNF)적민감성화제고HER2/neu항체적종류살상효응,장항HER2/neu단련항체C6.5여인종류배사인자hTNF-α융합,구건료scFvC6.5-hTNF-α융합단백,완성료중조단백재대장간균중적표체,산솔위400μg/L균액.경과친화층석화주복성,융합단백적순도체95%이상.ELISA시험표명,scFvC6.5-hTNF-α능구특이결합HER2/neu양성란소암세포SKOV-3화유선암세포MCF-7,이불결합HER2/neu음성적흑색소류세포A375.MTT시험표명,scFvC6.5-hTNF-α능구선택성지살상SKOV-3화MCF-7세포,이불영향A375세포적생장.저충종류세포특이성살상작용제시해면역독소구유종류파향치료적잠재응용개치.
