日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA的克隆、表达及保护性免疫评价
일본혈흡충호박산탈경매철류단백전장cDNA적극륭、표체급보호성면역평개
  • 万方数据
    中国科学C辑 중국과학C집
    SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
    2007年 1期 58-64 ,共7页

    余俊龙%汪世平%李文凯%戴橄%徐绍锐%何卓%彭先楚%周松华%刘雪琴

    여준룡%왕세평%리문개%대감%서소예%하탁%팽선초%주송화%류설금

    日本血吸虫%琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白%基因克隆%基因表达%免疫保护 日本血吸蟲%琥珀痠脫氫酶鐵硫蛋白%基因剋隆%基因錶達%免疫保護
    일본혈흡충%호박산탈경매철류단백%기인극륭%기인표체%면역보호
    根据GenBank日本血吸虫(Schistosoma japonicum)琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)不完整的表达序列标签(BU804141)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物, 以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板, 采用锚式PCR策略, 对SjSDISP cDNA不完整的3'端和5'端进行扩增、测序, 用序列比对拼接电子软件比对, 基于重叠区进序列合并, 获得1071 bp的SjSDISP全长cDNA. 序列分析推断该片段含有编码SjSDISP基因的完整阅读框, 编码278个氨基酸残基. 将其编码基因克隆到原核表达载体pQE30上, 在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达, 表达产物分子量约为32 kD. 用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行Western blot检测, 在预测位置上出现明显的识别条带. 用纯化的重组蛋白rSjSDISP免疫小鼠, 进行动物免疫保护性评价, 在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵数方面, 与佐剂对照组比较差异均具有显著性(P＜0.05, P＜0.01). 结果表明, 日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白酶(SjSDISP)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达; 表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果, 是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗日本血吸虫病疫苗候选分子.
    근거GenBank일본혈흡충(Schistosoma japonicum)호박산탈경매철류단백(SjSDISP)불완정적표체서렬표첨(BU804141)이급일본혈흡충성충cDNA문고재체다극륭위점린근핵감산서렬설계인물, 이일본혈흡충성충cDNA문고위모판, 채용묘식PCR책략, 대SjSDISP cDNA불완정적3'단화5'단진행확증、측서, 용서렬비대병접전자연건비대, 기우중첩구진서렬합병, 획득1071 bp적SjSDISP전장cDNA. 서렬분석추단해편단함유편마SjSDISP기인적완정열독광, 편마278개안기산잔기. 장기편마기인극륭도원핵표체재체pQE30상, 재대장간균M15중획득준학、고효표체, 표체산물분자량약위32 kD. 용일본혈흡충성충항원면역혈청대표체산물진행Western blot검측, 재예측위치상출현명현적식별조대. 용순화적중조단백rSjSDISP면역소서, 진행동물면역보호성평개, 재충하、매극간란、매극분란화매자자궁내란수방면, 여좌제대조조비교차이균구유현저성(P＜0.05, P＜0.01). 결과표명, 일본혈흡충호박산탈경매철류단백매(SjSDISP)전장cDNA성공극륭병재대장균중득도표체; 표체산물구유량호적항원성화동물면역보호효과, 시일충잠재적구유부분면역보호성적항일본혈흡충병역묘후선분자.
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