CAJ | 학술논문

背景:双向凝胶电泳是目前最好的蛋白质分离方法,然而胆汁样品中的盐,脂和蛋白酶对双向凝胶电泳干扰较大,影响电泳图谱的蘑复性.目的:通过对胆汁样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析,建立起一种适合于有效分离胆汁蛋白质的双向凝胶电泳分离方法.设计、时间及地点:胆汁双向凝胶电泳图谱对照实验.于2008-03/11在重庆市神经病学重点实验室完成.材料:胆汁标本取自于重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,于肝移植过程中从供体中取得.方法:将标本分别按3种不同方法进行处理:(D2D-Clean-up试剂盒处理胆汁标本:用裂解液,7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,质量浓度为0.4 g/L的过硫酸铵,65 mmol/L二硫苏糖醇,质量浓度为0.2 g/L的载体两性电解质溶解沉淀过夜.②在胆汁标本中加入4倍体积的预冷丙酮,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜.③在胆汁标本中加入4倍体积的预冷三氯乙酸/丙酮混合液,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜.经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳分离人胆汁蛋白质组.将切取的蛋白质点进行脱色,酶解,萃取,冷冻抽干后,进行质谱鉴定.主要观察指标:胆汁双向电泳图谱上蛋白质点数目,位置及重复性的比较.结果:3种方法均能得到理想的-向电泳等电聚焦,与单纯的丙酮沉淀法相比较,但三氯乙酸,丙酮沉淀法损失了较多的中小分子量的蛋白质,因此不适合于胆汁标本的处理.与2D-Cleanup试剂盒处理法相比,丙酮沉淀法纯化胆汁内盐、脂较丰富,去除干扰成分,具有较好的效果,具有成本低廉、操作简便等优势.结论:通过优化胆汁蛋白质提取、上样量和双向电泳重复件检测等步骤,建立了人胆汁双向凝胶电泳的方法,丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合足获取人胆汁蛋白质组的一种有效方法. 揹景:雙嚮凝膠電泳是目前最好的蛋白質分離方法,然而膽汁樣品中的鹽,脂和蛋白酶對雙嚮凝膠電泳榦擾較大,影響電泳圖譜的蘑複性.目的:通過對膽汁樣品雙嚮凝膠電泳的幾箇關鍵環節的分析,建立起一種適閤于有效分離膽汁蛋白質的雙嚮凝膠電泳分離方法.設計、時間及地點:膽汁雙嚮凝膠電泳圖譜對照實驗.于2008-03/11在重慶市神經病學重點實驗室完成.材料:膽汁標本取自于重慶醫科大學附屬第一醫院肝膽外科,于肝移植過程中從供體中取得.方法:將標本分彆按3種不同方法進行處理:(D2D-Clean-up試劑盒處理膽汁標本:用裂解液,7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,質量濃度為0.4 g/L的過硫痠銨,65 mmol/L二硫囌糖醇,質量濃度為0.2 g/L的載體兩性電解質溶解沉澱過夜.②在膽汁標本中加入4倍體積的預冷丙酮,用預冷的丙酮洗滌沉澱,然後用真空凍榦機抽榦,用裂解液溶解沉澱過夜.③在膽汁標本中加入4倍體積的預冷三氯乙痠/丙酮混閤液,用預冷的丙酮洗滌沉澱,然後用真空凍榦機抽榦,用裂解液溶解沉澱過夜.經過一維等電聚焦和二維SDS-PAGE電泳分離人膽汁蛋白質組.將切取的蛋白質點進行脫色,酶解,萃取,冷凍抽榦後,進行質譜鑒定.主要觀察指標:膽汁雙嚮電泳圖譜上蛋白質點數目,位置及重複性的比較.結果:3種方法均能得到理想的-嚮電泳等電聚焦,與單純的丙酮沉澱法相比較,但三氯乙痠,丙酮沉澱法損失瞭較多的中小分子量的蛋白質,因此不適閤于膽汁標本的處理.與2D-Cleanup試劑盒處理法相比,丙酮沉澱法純化膽汁內鹽、脂較豐富,去除榦擾成分,具有較好的效果,具有成本低廉、操作簡便等優勢.結論:通過優化膽汁蛋白質提取、上樣量和雙嚮電泳重複件檢測等步驟,建立瞭人膽汁雙嚮凝膠電泳的方法,丙酮沉澱與雙嚮凝膠電泳技術的結閤足穫取人膽汁蛋白質組的一種有效方法.
배경:쌍향응효전영시목전최호적단백질분리방법,연이담즙양품중적염,지화단백매대쌍향응효전영간우교대,영향전영도보적마복성.목적:통과대담즙양품쌍향응효전영적궤개관건배절적분석,건립기일충괄합우유효분리담즙단백질적쌍향응효전영분리방법.설계、시간급지점:담즙쌍향응효전영도보대조실험.우2008-03/11재중경시신경병학중점실험실완성.재료:담즙표본취자우중경의과대학부속제일의원간담외과,우간이식과정중종공체중취득.방법:장표본분별안3충불동방법진행처리:(D2D-Clean-up시제합처리담즙표본:용렬해액,7 mol/L뇨소,2 mol/L류뇨,질량농도위0.4 g/L적과류산안,65 mmol/L이류소당순,질량농도위0.2 g/L적재체량성전해질용해침정과야.②재담즙표본중가입4배체적적예랭병동,용예랭적병동세조침정,연후용진공동간궤추간,용렬해액용해침정과야.③재담즙표본중가입4배체적적예랭삼록을산/병동혼합액,용예랭적병동세조침정,연후용진공동간궤추간,용렬해액용해침정과야.경과일유등전취초화이유SDS-PAGE전영분리인담즙단백질조.장절취적단백질점진행탈색,매해,췌취,냉동추간후,진행질보감정.주요관찰지표:담즙쌍향전영도보상단백질점수목,위치급중복성적비교.결과:3충방법균능득도이상적-향전영등전취초,여단순적병동침정법상비교,단삼록을산,병동침정법손실료교다적중소분자량적단백질,인차불괄합우담즙표본적처리.여2D-Cleanup시제합처리법상비,병동침정법순화담즙내염、지교봉부,거제간우성분,구유교호적효과,구유성본저렴、조작간편등우세.결론:통과우화담즙단백질제취、상양량화쌍향전영중복건검측등보취,건립료인담즙쌍향응효전영적방법,병동침정여쌍향응효전영기술적결합족획취인담즙단백질조적일충유효방법.