CAJ | 학술논문

目的:研究低氧对人肝癌细胞株HepG2细胞表达缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor一1 alpha,HIF-1a)及缺氧特异性微小RNA一210(microRNA一210,miR-210)的影响,探讨肿瘤细胞在低氧环境下miR-210表达的变化情况.方法:HepG2细胞经体外常规培养后,用体积分数为1%的氧气分别培养HepG2细胞6、12、18和24 h.应用实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测细胞中HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化,同时用茎环RT-PCR检测miR-210的表达变化,分析HIF-1α与miR-210的表达关系.染色质免疫共沉淀PCR(chromatin immunoprecitation PCR,ChIP-PCR)分析HIF-1α与miR-210启动子结合的可能性.结果:低氧培养6～12 h,HIF-1α mRNA的表达量存在明显改变(P<0.05),而其蛋白的表达量从低氧培养开始直至24 h均有明显变化(P<0.005);与此同时,miR-210的表达量在低氧培养6～18 h时出现明显改变(P<0.01),且与HIF-1α蛋白表达存在明显的线性相关(R=0.795,P=0.037).进一步的ChIP-PCR实验表明,HIF-1α在HepG2细胞内可与miR-210启动子区近转录区的低氧反应元件(hypoxia response element,HRE)结合,从而发挥转录调控作用.结论:适度的低氧环境可能影响miR-210表达,其机制可能是通过HIF-1α结合其启动子来调节实现的.
목적:연구저양대인간암세포주HepG2세포표체결양유도인자1α(hypoxia-inducible factor일1 alpha,HIF-1a)급결양특이성미소RNA일210(microRNA일210,miR-210)적영향,탐토종류세포재저양배경하miR-210표체적변화정황.방법:HepG2세포경체외상규배양후,용체적분수위1%적양기분별배양HepG2세포6、12、18화24 h.응용실시형광정량RT-PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)화단백질인적법분별검측세포중HIF-1α mRNA화단백적표체변화,동시용경배RT-PCR검측miR-210적표체변화,분석HIF-1α여miR-210적표체관계.염색질면역공침정PCR(chromatin immunoprecitation PCR,ChIP-PCR)분석HIF-1α여miR-210계동자결합적가능성.결과:저양배양6～12 h,HIF-1α mRNA적표체량존재명현개변(P<0.05),이기단백적표체량종저양배양개시직지24 h균유명현변화(P<0.005);여차동시,miR-210적표체량재저양배양6～18 h시출현명현개변(P<0.01),차여HIF-1α단백표체존재명현적선성상관(R=0.795,P=0.037).진일보적ChIP-PCR실험표명,HIF-1α재HepG2세포내가여miR-210계동자구근전록구적저양반응원건(hypoxia response element,HRE)결합,종이발휘전록조공작용.결론:괄도적저양배경가능영향miR-210표체,기궤제가능시통과HIF-1α결합기계동자래조절실현적.