中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2011年
3期
181-187,后插1
,共8页
李屹晨%万仙子%杨湘玲%杨成%张薇%钟翎
李屹晨%萬仙子%楊湘玲%楊成%張薇%鐘翎
리흘신%만선자%양상령%양성%장미%종령
小鼠,皮层神经元%原代培养%NMDA受体%Wnt非经典通路
小鼠,皮層神經元%原代培養%NMDA受體%Wnt非經典通路
소서,피층신경원%원대배양%NMDA수체%Wnt비경전통로
目的 探讨NMDA受体激活引起的突触活动诱导Wnt非经典通路的活化.方法 构建C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元原代培养体系,用NMDA处理神经元细胞,并结合Western blotting、双免疫荧光染色等技术,检测神经元细胞内Wnt非经典通路的相关蛋白的变化.结果 免疫荧光染色显示成功建立了C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元体外培养体系,原代神经元细胞在体外培养10d生长良好,且纯度达90%;体外培养的神经元细胞内存在Wnt5a神经递质,经NMDA的刺激,发现Wnt非经典通路的两个标志性蛋白CaMKII和JNK的磷酸化水平显著增加,且Wnt非经典通路的一种受体Frizzled-5的蛋白表达水平也显著增加.进一步的研究显示,用NMDA竞争性抑制剂DAP5能够阻断NMDA引起的CaMKII和JNK蛋白的磷酸化水平的提高.结论 NMDA受体的激活会诱导Wnt非经典通路的活化.
目的 探討NMDA受體激活引起的突觸活動誘導Wnt非經典通路的活化.方法 構建C57BL/6J胎鼠大腦皮層神經元原代培養體繫,用NMDA處理神經元細胞,併結閤Western blotting、雙免疫熒光染色等技術,檢測神經元細胞內Wnt非經典通路的相關蛋白的變化.結果 免疫熒光染色顯示成功建立瞭C57BL/6J胎鼠大腦皮層神經元體外培養體繫,原代神經元細胞在體外培養10d生長良好,且純度達90%;體外培養的神經元細胞內存在Wnt5a神經遞質,經NMDA的刺激,髮現Wnt非經典通路的兩箇標誌性蛋白CaMKII和JNK的燐痠化水平顯著增加,且Wnt非經典通路的一種受體Frizzled-5的蛋白錶達水平也顯著增加.進一步的研究顯示,用NMDA競爭性抑製劑DAP5能夠阻斷NMDA引起的CaMKII和JNK蛋白的燐痠化水平的提高.結論 NMDA受體的激活會誘導Wnt非經典通路的活化.
목적 탐토NMDA수체격활인기적돌촉활동유도Wnt비경전통로적활화.방법 구건C57BL/6J태서대뇌피층신경원원대배양체계,용NMDA처리신경원세포,병결합Western blotting、쌍면역형광염색등기술,검측신경원세포내Wnt비경전통로적상관단백적변화.결과 면역형광염색현시성공건립료C57BL/6J태서대뇌피층신경원체외배양체계,원대신경원세포재체외배양10d생장량호,차순도체90%;체외배양적신경원세포내존재Wnt5a신경체질,경NMDA적자격,발현Wnt비경전통로적량개표지성단백CaMKII화JNK적린산화수평현저증가,차Wnt비경전통로적일충수체Frizzled-5적단백표체수평야현저증가.진일보적연구현시,용NMDA경쟁성억제제DAP5능구조단NMDA인기적CaMKII화JNK단백적린산화수평적제고.결론 NMDA수체적격활회유도Wnt비경전통로적활화.
