第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
3期
250-253
,共4页
沈新明%乔贵林%张玲%江培洲%黄华%姚开泰
瀋新明%喬貴林%張玲%江培洲%黃華%姚開泰
침신명%교귀림%장령%강배주%황화%요개태
曲细精管微注射%绿色荧光蛋白%转基因小鼠
麯細精管微註射%綠色熒光蛋白%轉基因小鼠
곡세정관미주사%록색형광단백%전기인소서
目的研究曲细精管微注射法建立转基因小鼠的可行性.方法选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体,应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质粒DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内.在注射后40 d左右,雄鼠与雌鼠合笼交配;分娩后3周,剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southem blotting技术进行整合检测.处死2只首建小鼠,荧光显微镜观察组织冰冻切片中EGFP的表达.结果共注射41只雄性小鼠,存活34只,其中32只具有交配、受精能力,获得仔鼠382只.仔鼠经检测,PCR阳性133只,Southem blotting阳性15只.小鼠的年龄、注射剂量与EGFP的整合率没有明显关系,荧光显微镜观察下没有观察到组织冰冻切片中EGFP明显表达.结论曲细精管微注射法是动物基因转移的一条简便可行的新途径.
目的研究麯細精管微註射法建立轉基因小鼠的可行性.方法選取人巨細胞病毒啟動子調控的增彊型綠色熒光蛋白(pCMV-EGFP)錶達載體,應用體視解剖鏡和顯微註射儀將不同劑量的被脂質體包裹的質粒DNA註射到不同年齡的KM小鼠麯細精管內.在註射後40 d左右,雄鼠與雌鼠閤籠交配;分娩後3週,剪取仔鼠尾,提取基因組DNA,應用PCR、Southem blotting技術進行整閤檢測.處死2隻首建小鼠,熒光顯微鏡觀察組織冰凍切片中EGFP的錶達.結果共註射41隻雄性小鼠,存活34隻,其中32隻具有交配、受精能力,穫得仔鼠382隻.仔鼠經檢測,PCR暘性133隻,Southem blotting暘性15隻.小鼠的年齡、註射劑量與EGFP的整閤率沒有明顯關繫,熒光顯微鏡觀察下沒有觀察到組織冰凍切片中EGFP明顯錶達.結論麯細精管微註射法是動物基因轉移的一條簡便可行的新途徑.
목적연구곡세정관미주사법건립전기인소서적가행성.방법선취인거세포병독계동자조공적증강형록색형광단백(pCMV-EGFP)표체재체,응용체시해부경화현미주사의장불동제량적피지질체포과적질립DNA주사도불동년령적KM소서곡세정관내.재주사후40 d좌우,웅서여자서합롱교배;분면후3주,전취자서미,제취기인조DNA,응용PCR、Southem blotting기술진행정합검측.처사2지수건소서,형광현미경관찰조직빙동절편중EGFP적표체.결과공주사41지웅성소서,존활34지,기중32지구유교배、수정능력,획득자서382지.자서경검측,PCR양성133지,Southem blotting양성15지.소서적년령、주사제량여EGFP적정합솔몰유명현관계,형광현미경관찰하몰유관찰도조직빙동절편중EGFP명현표체.결론곡세정관미주사법시동물기인전이적일조간편가행적신도경.
