人HL-60细胞GRα-LBD诱饵表达载体的构建和鉴定
인HL-60세포GRα-LBD유이표체재체적구건화감정
Construction and identification of the bait expression vector of GRα-LBD of human HL-60 cell
  • 万方数据
    重庆医科大学学报 중경의과대학학보
    UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
    2008年 4期 394-398 ,共5页

    钟梁%郝坡%刘北忠%王东生%刘畅%金丹婷%王翀%王春光

    종량%학파%류북충%왕동생%류창%금단정%왕충%왕춘광

    HL-60%GRα-LBD%诱饵载体%诱饵蛋白 HL-60%GRα-LBD%誘餌載體%誘餌蛋白
    HL-60%GRα-LBD%유이재체%유이단백
    目的:构建糖皮质激素(Glueocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础.方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GR α-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR α-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确.诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Westrrn blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白.结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础.
    목적:구건당피질격소(Glueocorticoid,GC)수체α배체결합역(GRα-LBD)적유이표체재체,위소분자배체효모삼잡교계통적건립전정기출.방법:RT-PCR확증HL-60세포적GR α-LBD,극륭입유이재체pGBKT7중,측서정학후,재파구건호적유이재체pGBKT7-GR α-LBD전화도효모AH109세포중,제취효모단백,병용Western blot분석유이단백적표체정황.동시검측유이단백적독성화자격활작용.결과:성공확증료GRα-LBD,병성공아극륭도pGBKT7중,측서결과정학.유이재체성공전화도효모AH109세포중,무독성화자격활작용,Westrrn blot분석야증실료효모세포고표체유이단백.결론:성공구건료GRα-LBD효모유이표체재체,위건립소분자배체효모삼잡교계통전정료기출.
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