生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
1228-1232
,共5页
曾雄智%Meichun Deng%皮建辉%Miaohua Jin%王贤纯%Songping Liang
曾雄智%Meichun Deng%皮建輝%Miaohua Jin%王賢純%Songping Liang
증웅지%Meichun Deng%피건휘%Miaohua Jin%왕현순%Songping Liang
敬钊缨毛蛛毒素-V%固相多肽合成%突变体%氧化复性%膜片钳
敬釗纓毛蛛毒素-V%固相多肽閤成%突變體%氧化複性%膜片鉗
경쇠영모주독소-V%고상다태합성%돌변체%양화복성%막편겸
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定.用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明.Atg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大:而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点.
敬釗纓毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V JZTX-V)是從敬釗纓毛蛛粗毒中純化到的一種新型河豚毒素不敏感型鈉通道抑製劑.為瞭深入研究該毒素的結構與功能關繫,應用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化學閤成方法閤成瞭用丙氨痠(Ala)替代JZTX-V第20位精氨痠殘基的突變體R20A-JZTX-V,閤成線性多肽經反相高效液相色譜分離純化後進行穀胱甘肽氧化複性.複性產物分彆用基質輔助激光解析飛行時間質譜(MALDI-TOF/TOF MS)進行分子量的鑒定.用膜片鉗電生理方法進行電壓門控鈉通道抑製活性分析.研究結果錶明.Atg20被Ala取代後,R20A-JZTX-V對大鼠揹根神經節細胞(DRG)膜上錶達的河豚毒素敏感型(TTX-S)鈉通道的抑製活性與天然JZTX-V相噹,提示Arg20與JZTX-V對TTX-S鈉通道的抑製活性無關或關繫不大:而R20A-JZTX-V對TTX-R鈉通道的抑製活性卻比天然JZTX-V下降瞭約18.3倍,說明Arg20是與JZTX-V對河豚毒素不敏感型(TTX-R)鈉通道抑製活性相關的關鍵活性殘基之一,推測R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20後改變瞭JZTX-V與TTX-R型鈉通道的作用位點.
경쇠영모주독소-V(Jingzhaotoxin-V JZTX-V)시종경쇠영모주조독중순화도적일충신형하돈독소불민감형납통도억제제.위료심입연구해독소적결구여공능관계,응용물갑양탄기(Fmoc)고상다태화학합성방법합성료용병안산(Ala)체대JZTX-V제20위정안산잔기적돌변체R20A-JZTX-V,합성선성다태경반상고효액상색보분리순화후진행곡광감태양화복성.복성산물분별용기질보조격광해석비행시간질보(MALDI-TOF/TOF MS)진행분자량적감정.용막편겸전생리방법진행전압문공납통도억제활성분석.연구결과표명.Atg20피Ala취대후,R20A-JZTX-V대대서배근신경절세포(DRG)막상표체적하돈독소민감형(TTX-S)납통도적억제활성여천연JZTX-V상당,제시Arg20여JZTX-V대TTX-S납통도적억제활성무관혹관계불대:이R20A-JZTX-V대TTX-R납통도적억제활성각비천연JZTX-V하강료약18.3배,설명Arg20시여JZTX-V대하돈독소불민감형(TTX-R)납통도억제활성상관적관건활성잔기지일,추측R20A-JZTX-V활성강저적원인시용Ala체대Arg20후개변료JZTX-V여TTX-R형납통도적작용위점.
