福建农林大学学报(自然科学版)
福建農林大學學報(自然科學版)
복건농림대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUJIAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
3期
269-273
,共5页
刘亮伟%卢雪丽%胡瑜%李运锋
劉亮偉%盧雪麗%鬍瑜%李運鋒
류량위%로설려%호유%리운봉
木聚糖酶%引物%碱基缺失%移码突变%检测
木聚糖酶%引物%堿基缺失%移碼突變%檢測
목취당매%인물%감기결실%이마돌변%검측
黑曲霉木聚糖酶xynⅢ酶分子改造时,常出现引物碱基缺失造成扩增基因移码突变.本研究将xynⅢ克隆入表达载体pET20b,分析移码突变酶C-端氨基酸序列,探讨了该碱基缺失突变的检测方法.引物中缺失1或2 bp碱基时,扩增基因产生2种移码突变酶,分别在正常酶分子C-端增加30或12个氨基酸,比正常酶分子质量分别增加6或2 ku;而缺失3 bp碱基时不产生移码突变,只比正常酶分子少1个氨基酸,含有6个His标签;通过SDS-PAGE可将移码突变酶与正常酶分子分开,从而将移码突变基因与正常基因分开,这个理论与DNA测序结果完全吻合.同时发现2 bp碱基缺失突变是1 bp碱基缺失突变的2倍,分析了其产生原因.最后,提出了避免引物中碱基缺失移码突变发生的预防措施.
黑麯黴木聚糖酶xynⅢ酶分子改造時,常齣現引物堿基缺失造成擴增基因移碼突變.本研究將xynⅢ剋隆入錶達載體pET20b,分析移碼突變酶C-耑氨基痠序列,探討瞭該堿基缺失突變的檢測方法.引物中缺失1或2 bp堿基時,擴增基因產生2種移碼突變酶,分彆在正常酶分子C-耑增加30或12箇氨基痠,比正常酶分子質量分彆增加6或2 ku;而缺失3 bp堿基時不產生移碼突變,隻比正常酶分子少1箇氨基痠,含有6箇His標籤;通過SDS-PAGE可將移碼突變酶與正常酶分子分開,從而將移碼突變基因與正常基因分開,這箇理論與DNA測序結果完全吻閤.同時髮現2 bp堿基缺失突變是1 bp堿基缺失突變的2倍,分析瞭其產生原因.最後,提齣瞭避免引物中堿基缺失移碼突變髮生的預防措施.
흑곡매목취당매xynⅢ매분자개조시,상출현인물감기결실조성확증기인이마돌변.본연구장xynⅢ극륭입표체재체pET20b,분석이마돌변매C-단안기산서렬,탐토료해감기결실돌변적검측방법.인물중결실1혹2 bp감기시,확증기인산생2충이마돌변매,분별재정상매분자C-단증가30혹12개안기산,비정상매분자질량분별증가6혹2 ku;이결실3 bp감기시불산생이마돌변,지비정상매분자소1개안기산,함유6개His표첨;통과SDS-PAGE가장이마돌변매여정상매분자분개,종이장이마돌변기인여정상기인분개,저개이론여DNA측서결과완전문합.동시발현2 bp감기결실돌변시1 bp감기결실돌변적2배,분석료기산생원인.최후,제출료피면인물중감기결실이마돌변발생적예방조시.
