CAJ | 학술논문

目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定.方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因.采用改进的重叠延伸PCR法将VH基因和VL(Vκ和Vλ)基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并将scFv文库基因克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E中,电转化E.coli TG1,构建单链抗体文库.结果:采用直接PCR和半巢式PCR扩增得到42条VH基因片段,16条Vκ基因片段,18条Vλ基因片段.混合的VH和VL等摩尔比连接后,产生的单链抗体文库基因大小为750 bp左右;转化后构建了文库容量为1.35×108的单链抗体文库.BstN Ⅰ酶切分析文库中的单链抗体基因结果显示,酶切得到的scFv指纹图谱均不相同.结论:构建的抗体文库多样性好,可用于多种人源性单链抗体的筛选.
목적:구건인원성천연서균체전시문고병대문고진행감정.방법:종미경주동면역건강지원자적외주혈림파세포중제취총RNA,반전록합성cDNA,용직접PCR급반소식PCR확증인항체중련(VH)급경련(Vκ화Vλ)가변구기인.채용개진적중첩연신PCR법장VH기인화VL(Vκ화Vλ)기인련접성인단련항체(scFv)기인,병장scFv문고기인극륭도서균체재체pCANTAB-5E중,전전화E.coli TG1,구건단련항체문고.결과:채용직접PCR화반소식PCR확증득도42조VH기인편단,16조Vκ기인편단,18조Vλ기인편단.혼합적VH화VL등마이비련접후,산생적단련항체문고기인대소위750 bp좌우;전화후구건료문고용량위1.35×108적단련항체문고.BstN Ⅰ매절분석문고중적단련항체기인결과현시,매절득도적scFv지문도보균불상동.결론:구건적항체문고다양성호,가용우다충인원성단련항체적사선.