华东师范大学学报（自然科学版）
華東師範大學學報（自然科學版）
화동사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2010年
4期
77-84
,共8页
陈能星%魏晓静%刘伟%侯连生
陳能星%魏曉靜%劉偉%侯連生
진능성%위효정%류위%후련생
盘基网柄菌%尿囊酸酶%原核表达%蛋白纯化%多克隆抗体
盤基網柄菌%尿囊痠酶%原覈錶達%蛋白純化%多剋隆抗體
반기망병균%뇨낭산매%원핵표체%단백순화%다극륭항체
运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100 bp,编码的蛋白约42 kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA 测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1 ∶ 64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC 蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC 融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC 免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求, 为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.
運用RT-PCR技術從盤基網柄菌(Dictyostelium discoideum)總mRNA中剋隆到瞭尿囊痠酶基因(allC),該基因編碼區開放讀框長1 100 bp,編碼的蛋白約42 kD.由于是在野生型和突變型細胞中差異錶達的片段,錶明該基因在盤基網柄菌多細胞髮育中起到重要作用,因此將allC剋隆入融閤錶達載體pET-32a(+),在大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中進行誘導錶達帶有6箇組氨痠標籤的尿囊痠酶(ALC)融閤蛋白,經鎳柱親和層析,穫得瞭電泳純蛋白.用純化的融閤蛋白免疫新西蘭大白兔,製備多剋隆抗體.ELISA 測得製備的抗ALC蛋白的多剋隆抗體的效價可達1 ∶ 64 000,Western Blotting檢測證明該抗體有較彊的針對ALC 蛋白的專一性.這些數據錶明重組質粒錶達的ALC 融閤蛋白具有良好的抗原性,製備ALC的多剋隆抗體有良好特異性和效價,能夠滿足針對ALC 免疫印跡和細胞內定位檢測等實驗要求, 為深入研究ALC蛋白在盤基網柄菌多細胞髮育的功能作用提供瞭有力工具.
운용RT-PCR기술종반기망병균(Dictyostelium discoideum)총mRNA중극륭도료뇨낭산매기인(allC),해기인편마구개방독광장1 100 bp,편마적단백약42 kD.유우시재야생형화돌변형세포중차이표체적편단,표명해기인재반기망병균다세포발육중기도중요작용,인차장allC극륭입융합표체재체pET-32a(+),재대장간균E.coli BL21(DE3)중진행유도표체대유6개조안산표첨적뇨낭산매(ALC)융합단백,경얼주친화층석,획득료전영순단백.용순화적융합단백면역신서란대백토,제비다극륭항체.ELISA 측득제비적항ALC단백적다극륭항체적효개가체1 ∶ 64 000,Western Blotting검측증명해항체유교강적침대ALC 단백적전일성.저사수거표명중조질립표체적ALC 융합단백구유량호적항원성,제비ALC적다극륭항체유량호특이성화효개,능구만족침대ALC 면역인적화세포내정위검측등실험요구, 위심입연구ALC단백재반기망병균다세포발육적공능작용제공료유력공구.
