中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
15期
4322-4327
,共6页
李伟%高玲%卢光琇%刘刚%王建%周民稳
李偉%高玲%盧光琇%劉剛%王建%週民穩
리위%고령%로광수%류강%왕건%주민은
视网膜%慢病毒载体%CRX
視網膜%慢病毒載體%CRX
시망막%만병독재체%CRX
目的 构建视紫红质启动子(rhodopsin,Rho)驱动的、大鼠视锥视杆细胞同源盒基因(cone-rod homeobox gene,CRX)为目的基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX,研究其在体外的转染效率.方法 用PCR法扩增质粒pEGFP-C3/CRX中的EGFP/CRX基因片段,取代慢病毒载体LV-Rho-EGFP中的EGFP片段,构建表达载体LV-Rho-EGFP/CRX,经酶切和双向测序验证.用磷酸钙沉淀法四质粒共转染293T细胞,包装、收集病毒,利用有限稀释法测定病毒滴度.用慢病毒原液感染光感受器细胞来源的人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44,观察感染情况.结果 成功构建慢病毒表达载体LV-Rho-EGFP/CRX,产生的慢病毒滴度为2×104 IU/ml,感染48h后,HXO-RB44细胞内可见强弱不等的绿色荧光.结论 重组载体LV-Rho-EGFP/CRX产生的慢病毒能感染光感受器细胞来源的HXO-RB44细胞,但还需提高转染的效率和滴度.
目的 構建視紫紅質啟動子(rhodopsin,Rho)驅動的、大鼠視錐視桿細胞同源盒基因(cone-rod homeobox gene,CRX)為目的基因的重組慢病毒載體LV-Rho-EGFP/CRX,研究其在體外的轉染效率.方法 用PCR法擴增質粒pEGFP-C3/CRX中的EGFP/CRX基因片段,取代慢病毒載體LV-Rho-EGFP中的EGFP片段,構建錶達載體LV-Rho-EGFP/CRX,經酶切和雙嚮測序驗證.用燐痠鈣沉澱法四質粒共轉染293T細胞,包裝、收集病毒,利用有限稀釋法測定病毒滴度.用慢病毒原液感染光感受器細胞來源的人視網膜母細胞瘤細胞株HXO-RB44,觀察感染情況.結果 成功構建慢病毒錶達載體LV-Rho-EGFP/CRX,產生的慢病毒滴度為2×104 IU/ml,感染48h後,HXO-RB44細胞內可見彊弱不等的綠色熒光.結論 重組載體LV-Rho-EGFP/CRX產生的慢病毒能感染光感受器細胞來源的HXO-RB44細胞,但還需提高轉染的效率和滴度.
목적 구건시자홍질계동자(rhodopsin,Rho)구동적、대서시추시간세포동원합기인(cone-rod homeobox gene,CRX)위목적기인적중조만병독재체LV-Rho-EGFP/CRX,연구기재체외적전염효솔.방법 용PCR법확증질립pEGFP-C3/CRX중적EGFP/CRX기인편단,취대만병독재체LV-Rho-EGFP중적EGFP편단,구건표체재체LV-Rho-EGFP/CRX,경매절화쌍향측서험증.용린산개침정법사질립공전염293T세포,포장、수집병독,이용유한희석법측정병독적도.용만병독원액감염광감수기세포래원적인시망막모세포류세포주HXO-RB44,관찰감염정황.결과 성공구건만병독표체재체LV-Rho-EGFP/CRX,산생적만병독적도위2×104 IU/ml,감염48h후,HXO-RB44세포내가견강약불등적록색형광.결론 중조재체LV-Rho-EGFP/CRX산생적만병독능감염광감수기세포래원적HXO-RB44세포,단환수제고전염적효솔화적도.
