微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2012年
3期
25-29
,共5页
王雪莲%卢岩%韦苇%杨雪%安春丽
王雪蓮%盧巖%韋葦%楊雪%安春麗
왕설련%로암%위위%양설%안춘려
短发夹RNA%人乳头瘤病毒18型%E6基因%E7基因
短髮夾RNA%人乳頭瘤病毒18型%E6基因%E7基因
단발협RNA%인유두류병독18형%E6기인%E7기인
应用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达.应用已鉴定的shRNA表达栽体pHPV1、pHPV2转染Hela细胞,G418筛选阳性细胞,建立稳定转染细胞株；倒置荧光显微镜检测转染情况；提取细胞内总RNA,RT-PCR方法检测HPV18 E6、E7 mRNA;Western Blot检测HPV18 E6、E7蛋白表达的变化；采用灰度分析软件对PCR扩增条带与蛋白质条带进行灰度分析.pHPV1实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的31％、38％,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的37％、31％；pHPV2实验组细胞内HPV18E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的54％、77％,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的52％、83％.pHPV1、pHPV2表达载体能抑制Hela细胞HPV18 E6、E7的表达,针对外显子区434-452的pHPV1抑制作用更强.
應用短髮夾RNA(Short hairpin RNA,shRNA)錶達載體抑製宮頸癌Hela細胞株HPV18 E6、E7基因的錶達.應用已鑒定的shRNA錶達栽體pHPV1、pHPV2轉染Hela細胞,G418篩選暘性細胞,建立穩定轉染細胞株；倒置熒光顯微鏡檢測轉染情況；提取細胞內總RNA,RT-PCR方法檢測HPV18 E6、E7 mRNA;Western Blot檢測HPV18 E6、E7蛋白錶達的變化；採用灰度分析軟件對PCR擴增條帶與蛋白質條帶進行灰度分析.pHPV1實驗組細胞內HPV18 E6、E7 mRNA含量分彆為陰性對照組的31％、38％,E6、E7蛋白分彆為陰性對照組的37％、31％；pHPV2實驗組細胞內HPV18E6、E7 mRNA含量分彆為陰性對照組的54％、77％,E6、E7蛋白分彆為陰性對照組的52％、83％.pHPV1、pHPV2錶達載體能抑製Hela細胞HPV18 E6、E7的錶達,針對外顯子區434-452的pHPV1抑製作用更彊.
응용단발협RNA(Short hairpin RNA,shRNA)표체재체억제궁경암Hela세포주HPV18 E6、E7기인적표체.응용이감정적shRNA표체재체pHPV1、pHPV2전염Hela세포,G418사선양성세포,건립은정전염세포주；도치형광현미경검측전염정황；제취세포내총RNA,RT-PCR방법검측HPV18 E6、E7 mRNA;Western Blot검측HPV18 E6、E7단백표체적변화；채용회도분석연건대PCR확증조대여단백질조대진행회도분석.pHPV1실험조세포내HPV18 E6、E7 mRNA함량분별위음성대조조적31％、38％,E6、E7단백분별위음성대조조적37％、31％；pHPV2실험조세포내HPV18E6、E7 mRNA함량분별위음성대조조적54％、77％,E6、E7단백분별위음성대조조적52％、83％.pHPV1、pHPV2표체재체능억제Hela세포HPV18 E6、E7적표체,침대외현자구434-452적pHPV1억제작용경강.
